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你知道細胞凍存液的配方嗎

時間:2023/1/9閱讀:4153
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假如要想做到那樣的目地,,那么就需要體細胞冷凍液,這類東西如何配備呢?下邊就來實際的了解一下,,細胞凍存液的秘方是啥,?

24.jpg

細胞凍存液的配方是什么?

(一)細胞凍存

1. 配置含10%DMSO或凡士林,、10~20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;

2. 取對數(shù)成長期的體細胞,,除去舊細胞培養(yǎng)液,用PBS清理,。

3. 除去PBS,,添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;

4. 抽濾1000rpm,5min;


5. 除去蛋白酶,,添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液,,用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱,,記數(shù),調(diào)整凍存液中體細胞的后相對密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;

6. 將體細胞分裝進凍存管中,,每管1~1.5 ml;

7. 在凍存管上標出體細胞的名字,凍存時間及作業(yè)者;

8. 凍存:標準的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當溫度達-25℃下列時,,可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,,則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h,,隨后放進-70℃電冰箱中留宿,,取下凍存管,移進液氮容器內(nèi),。


(二) 細胞復蘇

1. 從液氮容器中取下凍存管,,立即滲入37℃溫開水中,并時常搖晃令其盡早溶化,。

2. 從37℃水浴中取下凍存管,,開啟外蓋,用塑料吸管吸出來體細胞懸液,,加到離心管并滴加10倍以上細胞培養(yǎng)液,,攪拌;

3. 抽濾, 1000rpm,,5min;

4. 棄去上清液,,添加含10%小牛血清細胞培養(yǎng)液重懸體細胞,記數(shù),,調(diào)節(jié)體細胞相對密度,,打疫苗塑造瓶,37℃恒溫箱靜放塑造;

5. 隔日拆換一次細胞培養(yǎng)液,,再次塑造,。


常見問題

1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以凍存,但/好是為多數(shù)成長期體細胞,。在凍存前一天*是換一次細胞培養(yǎng)液;

2.將凍存管放進液氮容器或從這當中取下時,,要搞好安全防護工作中,以防凍傷;

3.凍存和再生/好用新配置的細胞培養(yǎng)液,。


以上是細胞凍存液的配方你知道嗎? 研域(上海)化學試劑有限公司總部設在上海,,公司專業(yè)經(jīng)營生命科學領域的研究試劑、實驗室消耗品等,,我們致力于向國內(nèi)外生命科學研究人員提供產(chǎn)品和技術服務,。

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