ELISA屬固相，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點,。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,。

溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學研究時，實驗表明,，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,，ELISA檢測試劑盒產(chǎn)物的生成可達極峰。

為加速反應(yīng),，可提高反應(yīng)的溫度,，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度,?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中,，以形成多的沉淀,。但因所需時間太長，在ELISA中一般不予采用,。

ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,，即加標本，加酶結(jié)合物,，加底物,。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡。

加標本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法 ELISA）需用稀釋的血清,，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。

也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保 證混和,。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成,。在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),，即加標本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當,。

研域（上海）化學試劑有限公司代理和經(jīng)銷的分子生物學試劑,、生化試劑、免疫試劑,、ELISA試劑盒,、細胞株、培養(yǎng)基,、胎牛血清,、抗體、標準品,、對照品等試劑產(chǎn)品,，已被廣泛應(yīng)用于生命科學基礎(chǔ)與開發(fā)研究、生化領(lǐng)域,、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域,。我們長期積累的客戶已遍布國內(nèi)外各地大學、研究所,、醫(yī)院,、國家重點實驗室等單位。