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大鼠胰島素細(xì)胞傳代方法:我們在收到細(xì)胞后,,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
如果細(xì)胞已長滿,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,,用PBS(不含鈣,,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來,。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代,;2~3天1次,。
如果細(xì)胞未長滿,,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),,嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),。
細(xì)胞來源于美國ScienCell實(shí)驗(yàn)室,、美國ATCC細(xì)胞庫,所有細(xì)胞均為原代細(xì)胞,,非細(xì)胞系,。細(xì)胞經(jīng)過嚴(yán)格的控制(從組織來源、實(shí)驗(yàn)室條件等方面),,純度可達(dá)98%,。不同的細(xì)胞傳代次數(shù)不一。多數(shù)細(xì)胞種類是從胚胎提取,,于原代(或二代)凍存在液氮中,。大鼠胰島素細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸,客戶收到細(xì)胞后,,從干冰中取出放入液氮中保存,,待實(shí)驗(yàn)安排好后,解凍后即可以進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng),。美國ATCC細(xì)胞庫,、ScienCell實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞,、培養(yǎng)基都是經(jīng)過嚴(yán)格檢驗(yàn),分離,、配制而成,,產(chǎn)品質(zhì)量過硬。
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