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檢測植物試劑盒操作步驟:
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔,、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50μl,。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 秒后棄去,,如此 重復(fù) 5 次,拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,,空白孔除外,。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 a50μl,,再加入顯色劑 b50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(od 值),。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
計算和結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值 0.15
陰性判定:樣品 od 值< 臨界值(cut off)者為金葡萄球菌腸毒素(se)陰性 陽性判定:樣品 od 值≥ 臨界值(cut off)者為金葡萄球菌腸毒素(se)陽性,。
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