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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)誤差概率如何降低?在實(shí)驗(yàn)操作的過程中,,我們除了需要多點(diǎn)細(xì)心之外,還有一些需要重點(diǎn)注意的地方:
1:檢驗(yàn)技師
應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器,、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,,對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決,。
2:校對
使用校對過的微量移液器,,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要,。
3:仔細(xì)閱讀說明書
嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作,。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn),。
4:洗滌
洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性,。洗滌液要新鮮,,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,,也可能出現(xiàn)假陽性,。
5:反應(yīng)時(shí)間
反應(yīng)時(shí)間過長,酶失活,;反應(yīng)時(shí)間過短,,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,,容易洗掉,,都可能造成假陰性。 6:保存期
注意ELISA試劑盒保存期,,過保存期的試劑不能使用,。
7:試劑的實(shí)用性
試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要,。在試劑啟用前,,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),,判定試劑符合要求后方可使用,。
8:掌握顯色時(shí)間
顯色時(shí)間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,,底物結(jié)合物的量過少,,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色,,應(yīng)判為假陽性,,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,,不可報(bào)陽性,,這可能是本底顯色的結(jié)果。
9:加樣
如果加樣不準(zhǔn)確,,酶生成物的量不能確定,,ELISA試劑盒直接影響顯色結(jié)果,。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重,。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,,而且試劑長時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),,保存期會縮短甚至失效,。
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