我們在做一項試驗的時候,，需要了解的過程與所需物品是*的,。而今天,，我司在這里要給朋友們共享的便是試驗制得細胞的樣本,，您需做好下文中的這六步兩留意,。所謂的六步兩留意也便是操作的六個過程，和兩條留意事項,，下面我們就來具體的看看吧,。
試驗之前，我公司的技術人員為朋友們特別準備說明晰所需的物品有哪些：
1、培養(yǎng)基,；不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基
2,、處理玻片：將多聚賴氨酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl緩沖液中），涂布于玻片上,，枯燥后即可使用,。或許APES 2ml溶于100ml丙酮中,，將玻片浸泡入內(nèi),，取出晾干，180℃枯燥備用,。
3,、洗刷液；0.1M,，pH7.2～7.4PBS
4,、細胞固定液：4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含有1/1000 DEPC。
5,、乙醇：70%  90%  100%
6,、胃蛋白酶溶液：用0.1N HCl將其稀釋為100μg/ml
7、設備：烤箱,，CO2培養(yǎng)箱,，倒置顯微鏡，玻璃載玻片,，原位雜交蓋玻片,，溫箱，加樣器和吸頭等,。
操作過程：
1,、在37℃ 5% CO2條件下將細胞加在處理的載玻片上，用培養(yǎng)基培養(yǎng),，時間經(jīng)過預試驗確定,；
2、細胞長好后,，用洗刷液洗2分鐘×3次,，室溫下將其放入細胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗刷,；
3,、室溫下用洗刷液充分洗刷固定細胞，（枯燥后-20℃冰凍保存2周以上）
4,、雜交前將固定的細胞進行如下處理,；順次在70%，90%,，100%的乙醇中浸泡,，脫水每次5min，用二甲苯洗刷,，除掉殘留脂質(zhì)順次在100%,，90%，70%乙醇中浸泡,，進行再水化,，每次5min，zui后浸泡于洗刷液中,；
5,、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細胞，以添加細胞對大分子試劑的通透性,，再用洗刷液洗5min,；
6、用1%甲醛固定10min,，用洗刷液洗凈,。
留意！
1,、所有溶液都必須用RNA酶按捺劑處理,。
2、操作中重要的是及時固定,，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,，以按捺RNA酶對mRNA的分解效果。此外,，過度固定對原位雜交有顯著的不利影響,。