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當前位置:研域(上海)化學試劑有限公司>>技術文章>>六步兩留意:關于試驗制得細胞的樣本
我們在做一項試驗的時候,,需要了解的過程與所需物品是*的,。而今天,,我司在這里要給朋友們共享的便是試驗制得細胞的樣本,您需做好下文中的這六步兩留意,。所謂的六步兩留意也便是操作的六個過程,,和兩條留意事項,下面我們就來具體的看看吧,。
試驗之前,,我公司的技術人員為朋友們特別準備說明晰所需的物品有哪些:
1、培養(yǎng)基,;不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基
2,、處理玻片:將多聚賴氨酸溶液(溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl緩沖液中),涂布于玻片上,,枯燥后即可使用,。或許APES 2ml溶于100ml丙酮中,,將玻片浸泡入內,,取出晾干,180℃枯燥備用,。
3,、洗刷液;0.1M,,pH7.2~7.4PBS
4,、細胞固定液:4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2~7.4)含有1/1000 DEPC。
5,、乙醇:70% 90% 100%
6,、胃蛋白酶溶液:用0.1N HCl將其稀釋為100μg/ml
7、設備:烤箱,,CO2培養(yǎng)箱,,倒置顯微鏡,玻璃載玻片,,原位雜交蓋玻片,,溫箱,加樣器和吸頭等,。
操作過程:
1,、在37℃ 5% CO2條件下將細胞加在處理的載玻片上,用培養(yǎng)基培養(yǎng),,時間經過預試驗確定,;
2、細胞長好后,,用洗刷液洗2分鐘×3次,,室溫下將其放入細胞固定液中固定30-60min,,蒸餾水洗刷;
3,、室溫下用洗刷液充分洗刷固定細胞,,(枯燥后-20℃冰凍保存2周以上)
4、雜交前將固定的細胞進行如下處理,;順次在70%,,90%,100%的乙醇中浸泡,,脫水每次5min,,用二甲苯洗刷,除掉殘留脂質順次在100%,,90%,,70%乙醇中浸泡,進行再水化,,每次5min,,zui后浸泡于洗刷液中;
5,、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細胞,,以添加細胞對大分子試劑的通透性,再用洗刷液洗5min,;
6,、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗凈,。
留意,!
1、所有溶液都必須用RNA酶按捺劑處理,。
2,、操作中重要的是及時固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,,以按捺RNA酶對mRNA的分解效果,。此外,過度固定對原位雜交有顯著的不利影響,。
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