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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年

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研域課堂:細(xì)胞傳代的辦法您做對(duì)了嗎,?

時(shí)間:2019/8/23閱讀:1732
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經(jīng)過自主研發(fā)和吞并重組不斷擴(kuò)展企業(yè)產(chǎn)品線,,逐漸發(fā)展為試劑的專業(yè)制造商和電子商務(wù)集成供應(yīng)商,成為試劑職業(yè)發(fā)展的者,。開端細(xì)胞傳代前,,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否*。

 

一:細(xì)胞與試劑方面:

1,、細(xì)胞(單層細(xì)胞,,鏡檢合適)

2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)

3,、滅活小牛血清,、慶大霉素溶液(1 萬(wàn)單位)

4、7.5%NaHC03 溶液

5,、0.25%胰蛋白酶

6,、 PBS 洗液。

二:實(shí)驗(yàn)小用具方面:

1,、小方瓶(100m1)

2,、克氏瓶

3、膠塞

4,、吸管(10ml,、1m1)

5、細(xì)胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

6,、C02 孵箱

7,、超凈臺(tái)

8、倒置顯微鏡

9,、4℃,、- 20℃冰箱
 
三:細(xì)胞傳代的操作過程

1、選擇細(xì)胞:鏡檢細(xì)胞,,選擇成長(zhǎng)狀態(tài)杰出,,細(xì)胞界限明晰,具有立體感,,形態(tài)好無(wú)污染,、無(wú)異常及可疑病變細(xì)胞。

2,、配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),,加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml,。(僅供一般參考),。

3、消化細(xì)胞:先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞外表1-2 次,,每次10m1,,棄去洗液,向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,,每瓶1m1,,細(xì)胞瓶平放,使消化液*覆蓋細(xì)胞外表,。

4,、至細(xì)胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打渙散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,,再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。

5,、加塞,,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細(xì)胞接種濃度決定),。

6,、填寫傳代記載。

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