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捕獲包被法檢測抗體
捕獲包被法(亦稱反向間接法)ELISA,,首要用于血清中某種抗體亞型成分(如IgM)的測定,。以目前常用的IgM測定為例,因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在,,則后者可攪擾IgM的測定,。因此先將一切血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM,。IgM抗體的檢測用于流行癥的前期確診中,。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其間包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM),。然后參加抗原,,此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶符號針對抗原的特異性抗體,。再與底物作用,,呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用于病毒性感染的前期確診,。類風濕因子(RF)相同能攪擾捕獲包被法測定IgM抗體,,導致假陽性反響。因此中和IgG的間接法近來頗受喜愛,,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功,。
捕獲法測抗體的扼要操作過程:
1)特異性捕獲抗體的包被,先把能特異性結合待測抗原的抗體固定于固相載體外表,;
2)參加待測樣品,,通過固定在載體外表的針對該抗原的抗體固定于載體外表;
3)參加特異性抗原以及針對該特異性抗原的酶標抗體,;
4)參加酶促反響底物,,發(fā)作顯色反響,顯色的深淺與待測抗體的量成正比,。
捕獲包被法檢測抗體
近年在親和素-生物素體系上又發(fā)展出ABS-ELISA法 ,。親和素是一種糖蛋白,每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成,,生物素為小分子化合物,。用化學辦法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶構成生物素符號產(chǎn)品,符號辦法頗為簡潔,,并且不影響抗體或酶原有的生物學活性,。親和素生物素體系,簡稱ABS(avidin-biotin system),。因為親和素與生物素間的親和力*,,結合迅速,,且安穩(wěn),使BAS符號技能比慣例酶聯(lián)免疫,、放射免疫及熒光免疫技能有著更高的靈敏度,,為微量抗原、抗體的檢測拓荒了新的途徑,,大大提高了檢測的靈敏度,但該辦法比一般ELISA多用了兩種試劑,,增加了操作過程,,因此在臨床查驗中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分為酶符號親和素-生物素(LAB)法和橋聯(lián)親和素-生物素(ABC)法兩種類型,。兩者均以生物素符號的抗體(或抗原)代替原ELISA體系中的酶標抗體(抗原),。
在LAB法中,將特異性抗體生物素化,、酶分子符號在親和素分子上,,生物素化抗體與被檢抗原結合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結到抗原分子上,,經(jīng)酶促反響即可檢出抗原,,因此提高檢測的敏感度。
ABC法相同將特異性抗體生物素化,、酶分子標在生物素上,,親和素和酶標生物素需要先按必定比例構成ABC復合物,這種網(wǎng)絡結構結合了很多的酶分子,,當親和素尚未被酶標生物素飽滿時,,生物素化抗體即可與之結合, 使被檢抗原、生物素化抗體和酶標生物素聯(lián)成一體,。
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