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PCR常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)

時(shí)間:2011/5/13閱讀:2586
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PCR常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)

1.矩陣形式代表什么?

矩陣形式就是體外包裝的cDNA文庫(kù)以二維矩陣的形式進(jìn)行排列組合,,用于篩選特定的基因和片段,。

2.SM是什么意思,?

SM是“懸浮培養(yǎng)液”的縮寫。

3.Ct 值的定義

在熒光定量PCR技術(shù)中,,有一個(gè)很重要的概念 -- Ct值,。C代表Cycle,,t代表threshold,,Ct值的含義是:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

4.什么是內(nèi)參照法?

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時(shí),,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板,。   

5.PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,,再加入抗地高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,,zui終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),,若加入內(nèi)標(biāo),,作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的,。
 

6. 什么是競(jìng)爭(zhēng)法,?

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記),。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,,而待測(cè)模板不被酶切,,可通過(guò)電泳或液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù),。   

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