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ELISA檢測系統(tǒng)可以說是現(xiàn)在使用多的檢測方法,,而且技術(shù)手段很多,,對于花板,假陽性,,全顯色,,全部顯色,顯色比空缺還低,,這些都起到了至關(guān)重要的作用,,一定要多注意,那么elisa檢測系統(tǒng)穩(wěn)定,,這些實驗過程都要注意,。
常用feng鎖劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠,;脫脂奶粉,,比較價廉,可以高濃度使用(5%-10%),;還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等,。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,看一下可不可以應用到自己試驗當中去,。但選用什么,,要依據(jù)試驗詳細來實踐。
應留意以下原理:因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,,這種物理吸附長短特異性的,,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點,、濃度等的影響,,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面,。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。
還有有的包被原可能不是蛋白,對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,,親和素生物素:先親和素先包被載體,,加入生物素化的DNA,這種包被方法平均,、牢固,,已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。
包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,,是否降解,,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,,做重組蛋白時,,技術(shù)員都嚴格警告一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。feng鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。但有時因為試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包,。
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