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1、一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,,從孔的左邊靠近底部加入,,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再,,繼續(xù)加剩余的半邊板子,,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,,右手輕輕敲擊板的右邊緣,,注意把握力度,太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),,依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,,放入37度培養(yǎng)箱,。
6孔板12孔板或24孔板,均采用將個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基,,晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底,,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤(rùn)孔底,,其它孔一次類(lèi)推,,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,,加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,,而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下,。
2、細(xì)胞懸液加完后,,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,,對(duì)著燈光,從底部往上看,,看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán),。然后從底部敲擊,使之分散,。
3、如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,,效果不錯(cuò),,就是振幅小,頻率高的那種,。
4,、細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài),。離心后,,要充分懸浮,!還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,,是要晃得!晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,,就會(huì)不均勻!
5,、一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后,,正常處理,在培養(yǎng)瓶里吹勻,,然后鋪6孔板,,每孔2毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,,然后放到培養(yǎng)箱里,,輕微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈?;旧?4小時(shí)之后觀察 每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻,。
6、計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,,混勻后,,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,,顯微鏡下觀察,,如果不均勻,按上述方法再晃,。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,,在種六孔板的過(guò)程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子,,瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈,。
7,、放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),,每個(gè)方向5到6次,,但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過(guò)多的運(yùn)動(dòng),,例如放到鏡下去看,,否則很容易就又聚到中間去了。
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