在ELISA中一般有3次加樣步聚,，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物,，加底物,。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡。

加標(biāo)本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣,。有此測(cè)定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和,。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,，使加液過(guò)程迅速完成。

那么在ELISA中除了包被外,，一般需進(jìn)行45加樣,。其中“45加樣”是什么意思？這里的45加樣,，應(yīng)當(dāng)為45度加樣,，即加樣槍的吸頭所在的直線應(yīng)當(dāng)與板條所在的直線呈45度角,。

正確的加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁加入,，應(yīng)注意：

（1）角度太小,，會(huì)使液體殘留在孔壁上，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確,！

（2）吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處,！      

在ELISA中加樣還要注意如下問(wèn)題：

1. 吸取樣品時(shí)，加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體,；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體,，這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，加樣不準(zhǔn)確,！

2. 不要將吸頭伸入孔中,，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會(huì)將孔中的液體吹起來(lái),，加樣不準(zhǔn)確,！