包被原的性質(zhì)很重要,，蛋白濃度,，是否降解,，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,，所以保留抗原很重要，ELISA試劑盒做重組蛋白時(shí),，師兄都嚴(yán)格警告一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理,。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。但有時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)的需要,，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。

    常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA,；10%的小牛血清或1%明膠,；脫脂奶粉，比較價(jià)廉,，可以高濃度使用（5%－10％）,；還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐,，看一下可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去,。但選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)詳細(xì)來實(shí)踐,。應(yīng)留意以下原理：ELISA試劑盒因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長(zhǎng)短特異性的,，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點(diǎn)、濃度等的影響,，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被,，親和素生物素:先親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA，這種包被方法平均,、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。

    我們?cè)谑褂肊LISA試劑盒96孔板的實(shí)驗(yàn)測(cè)定的時(shí)候，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)"，也就是外周孔顯色較中心孔深,。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所,。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中,，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱,，板也升溫時(shí)，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度,。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí),，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)",，并且可提高測(cè)定的重復(fù)性,。 
    還有就是在實(shí)驗(yàn)中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟,。提醒注意：加樣不可太快,，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡,。ELISA試劑盒太快的話無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性,。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附,。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染,。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性,，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致,。