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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>酶免疫試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)及局限性
酶免疫試驗(yàn)之所以能成為臨床免疫檢驗(yàn)中的主導(dǎo)技術(shù),,是與它的方法上的特異性和靈敏性、操作上的簡便性以及試劑的穩(wěn)定性分不開的,,還有很重要的一點(diǎn)是,,其對(duì)環(huán)境沒有污染威脅。
盡管如此,,作為一項(xiàng)免疫檢驗(yàn)技術(shù),,酶免疫試驗(yàn)還是有其局限性的,不但所檢測(cè)的生物學(xué)體液樣本如血清中有可能存在各種干擾實(shí)驗(yàn)的因素,,而且在實(shí)驗(yàn)過程中,,影響結(jié)果的因素也很多,尤其是進(jìn)行手工的ELISA測(cè)定時(shí),。
此外,在定性ELISA測(cè)定中,,陽性判定值(CUT-OFF)的建立,,是在一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)上的,相對(duì)于某個(gè)具體的受檢者來說,,其有可能并不具備正確性,。例如,使用ELISA方法檢測(cè)抗HCV及抗HIV或HBsAg,,有時(shí)候,,檢測(cè)所得的陽性結(jié)也許并不是真正的陽性,,而需要使用其他方法如重組免疫印跡(recombinantimmunoblotas—say,RIBA),、蛋白印跡(Westernbl,。t,WB)或中和試驗(yàn)來確認(rèn),,才能報(bào)告陽性,。這里抗HCV和抗HIV的檢測(cè)均使用病毒部分的基因工程抗原,其他一些病毒如流感病毒,、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人體后,,亦或一些自身抗體,也有可能會(huì)導(dǎo)致假陽性反應(yīng),。
HBsAg的測(cè)定主要是弱陽性的問題,,這與ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”有關(guān)系,處于cut-off值周圍亦即“灰區(qū)”的結(jié)果的可靠性通常較差,,陽性當(dāng)然需要確認(rèn),,陰性卻也未必是真,這一點(diǎn)在血站篩檢獻(xiàn)血員血液時(shí)是非常重要的,,必須引起注意,,并采取適當(dāng)?shù)拇胧乐勾祟悋?yán)重影響人們健康的傳染性疾病經(jīng)輸血傳播,,本書后面的有關(guān)章還會(huì)對(duì)此問題做詳細(xì)論述,。此外,免疫測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體的特異反應(yīng),,因此,,如檢測(cè)抗原,除了要求抗體(單抗或多抗)是特異的外,,還要求待測(cè)抗原上必須存在有能與所用抗體結(jié)合的抗原決定簇,,如果因?yàn)榛蛲蛔儗?dǎo)致某些位點(diǎn)的不表達(dá),或者結(jié)合位點(diǎn)因?yàn)槟承┰虮环忾]或阻斷,,都會(huì)影響抗體與抗原的結(jié)合,,造成假陰性結(jié)果。
如檢測(cè)抗體,,則要求所用包被抗原應(yīng)盡可能包含所有的特異抗原決定簇,,同時(shí)又盡可能不含有非特異的成分,這一點(diǎn)往往由于技術(shù)水平的限制而難以*做到,,因此,,從某種意義上來說,假陽性假陰性是不能*避免的,,盡管通過努力,,可以將其降至很低的程度,。這也是建立臨床免疫檢驗(yàn)方法所努力的方向。
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