根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件的不同,，選擇的要求也是有區(qū)別的。

    在elisa試劑盒中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,，其中包括：

    (1)固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

    (2)包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml,。

    (3)酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。

    (4) 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉,、安全,、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是雙氧水在臨用前加入。