在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚,，即加標本，加酶結(jié)合物,，加底物,。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡。 加標本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標本應(yīng)更換吸嘴,，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣,。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清,，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其中加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器,，使加液過程迅速完成,。
可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）,、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液,、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清,、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）,。大部分ELISA檢測均以血清為標本,。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清,。制備血漿標本需借助于抗凝劑,，而血清標本只要待血清自然凝固后即可取得。除特殊情況外,，在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標本,。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標本可按常規(guī)方法采集,，應(yīng)注意避免溶血,，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中,，溶血標本可能會增加非特異性顯色,。
ELISA試劑盒血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,，其中的可發(fā)生聚合,，在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深。一般說來,，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,，超過一周測定的需低溫冰存,。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均,，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡,，可上下顛倒混和,，不要在混勻器上強烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫?yīng)先離心或過濾,，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,，也可加入適當防腐劑,。