ELISA試劑盒因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,，這種物理吸附長短特異性的,，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點,、濃度等的影響,，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。還有有的包被原可能不是蛋白,，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA,，這種包被方法平均、牢固,，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。
ELISA試劑盒檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段,。自己也為此苦惱過很長一段時間，跟著自己技術(shù)水平得進步,，或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣,，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣,，做ELISA已是輕車熟路了,，ELISA試劑盒以前檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色,，一個工作日基本搞定,。可是在新老手操縱過程中老是會泛起或大或小的題目,，本人在剛開始做ELISA時就面對良多災(zāi)題,，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣,，好比說花板,，假陽性，全顯色,，全部顯色,，顯色比空缺還低。
常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA,；10%的小牛血清或1%明膠,；脫脂奶粉，比較價廉,，可以高濃度使用（5%－10％）,；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去,。但*選用什么,，要依據(jù)試驗詳細(xì)來實踐。
ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很重要,，蛋白濃度,，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,，所以保留抗原很重要,，我做重組蛋白時，ELISA試劑盒師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理,。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。但有時因為試驗的需要,，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。