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ELISA試劑盒研究系統(tǒng)在實驗中更穩(wěn)定的方法

時間:2018/4/9閱讀:1317
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ELISA試劑盒因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點,、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,,故更易吸附到固相載體表面,。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白,,對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,,親和素生物素:先親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,,這種包被方法平均,、牢固,已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
ELISA試劑盒檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段,。自己也為此苦惱過很長一段時間,,跟著自己技術(shù)水平得進步,或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣,,也是熟能生巧吧,,現(xiàn)在做方陣,做ELISA已是輕車熟路了,,ELISA試劑盒以前檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的,,現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色,一個工作日基本搞定,。可是在新老手操縱過程中老是會泛起或大或小的題目,,本人在剛開始做ELISA時就面對良多災(zāi)題,,固然有師兄師姐鋪路,,但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣,好比說花板,,假陽性,,全顯色,全部顯色,,顯色比空缺還低,。
常用封鎖劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠,;脫脂奶粉,,比較價廉,可以高濃度使用(5%-10%),;還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等,。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當中去,。但*選用什么,,要依據(jù)試驗詳細來實踐。
ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很重要,,蛋白濃度,,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,,所以保留抗原很重要,,我做重組蛋白時,ELISA試劑盒師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理,。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為試驗的需要,,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包,。

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