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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年

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ELISA試劑盒備案參考評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

時(shí)間:2018/3/29閱讀:1745
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1,、標(biāo)準(zhǔn)曲線
ELISA試劑盒定量方法:標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成,測(cè)定次數(shù)不少于5次,以確定工作濃度范圍和IC50范圍,。
定性方法:工作濃度范圍通過陰性,、臨界值濃度和陽(yáng)性的樣品測(cè)定來確定,每個(gè)濃度重復(fù)不少于5次,,濃度與響應(yīng)值之間應(yīng)有一定的關(guān)系,。
2、檢測(cè)限和定量限
檢測(cè)限:20份空白樣品測(cè)定均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差,。
定量限:應(yīng)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線中zui低濃度點(diǎn),。對(duì)于定量方法,應(yīng)對(duì)該濃度樣品至少測(cè)定6次進(jìn)行驗(yàn)證,,而不能通過外延法推斷,。
3、臨界值(cut-off值)的確定
對(duì)于有zui高殘留*的藥物,,檢測(cè)方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測(cè)定的均值減去1.64倍標(biāo)準(zhǔn)差,,即95%置信限處。
對(duì)于禁用藥物,,檢測(cè)方法的臨界值為定量限,,該值應(yīng)達(dá)到*的指標(biāo)。
4,、精密度和準(zhǔn)確度
ELISA試劑盒對(duì)于有zui高殘留*的藥物,,添加濃度為MRL及MRL上下各一個(gè)濃度;對(duì)于禁用藥物,,添加濃度為定量限和2倍定量限,,每個(gè)添加濃度至少測(cè)定5個(gè)平行樣,并至少進(jìn)行3批實(shí)驗(yàn)(不同檢測(cè)日期,,不同標(biāo)準(zhǔn)曲線,,不同批次試劑盒)。
(1)準(zhǔn)確度:回收率范圍大于40%或符合相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求,。
(2)精密度:以變異系數(shù)表示,。
批內(nèi)變異系數(shù):每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%,對(duì)于禁用藥物小于或等于30%.
批間變異系數(shù):所有樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%,,對(duì)于禁用藥物小于或等于40%.
定性方法:陰性和陽(yáng)性樣品各測(cè)定不少于50份,,確定假陽(yáng)性率和假陰性率。
5,、交叉反應(yīng)
試劑盒與待檢藥物類似物,、代謝物或共同存在的藥物測(cè)定交叉反應(yīng)率。
6,、保存期
保存期通過保存條件的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果確定,。
7、ELISA試劑盒復(fù)核試驗(yàn)
復(fù)核試驗(yàn)主要內(nèi)容應(yīng)包括:
(1)定量方法:檢測(cè)限、IC50以及至少兩個(gè)添加濃度的準(zhǔn)確度和精密度,,并與理化方法(或與具代表性進(jìn)口試劑盒)比較,。
(2)定性方法:檢測(cè)限、假陽(yáng)性率和假陰性率,。

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