1,、標準曲線
ELISA試劑盒定量方法：標準曲線至少由5個濃度組成,，測定次數(shù)不少于5次,，以確定工作濃度范圍和IC50范圍,。
定性方法：工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測定來確定,，每個濃度重復不少于5次,，濃度與響應值之間應有一定的關系。
2,、檢測限和定量限
檢測限：20份空白樣品測定均值加3倍標準差,。
定量限：應大于標準曲線中zui低濃度點。對于定量方法,，應對該濃度樣品至少測定6次進行驗證,，而不能通過外延法推斷。
3,、臨界值（cut-off值）的確定
對于有zui高殘留*的藥物,，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復3次測定的均值減去1.64倍標準差，即95%置信限處,。
對于禁用藥物,，檢測方法的臨界值為定量限，該值應達到*的指標,。
4,、精密度和準確度
ELISA試劑盒對于有zui高殘留*的藥物，添加濃度為MRL及MRL上下各一個濃度,；對于禁用藥物,，添加濃度為定量限和2倍定量限，每個添加濃度至少測定5個平行樣,，并至少進行3批實驗（不同檢測日期,，不同標準曲線，不同批次試劑盒）,。
（1）準確度：回收率范圍大于40%或符合相應檢測標準的要求,。
（2）精密度：以變異系數(shù)表示。
批內(nèi)變異系數(shù)：每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%,，對于禁用藥物小于或等于30%.
批間變異系數(shù)：所有樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%,，對于禁用藥物小于或等于40%.
定性方法：陰性和陽性樣品各測定不少于50份,，確定假陽性率和假陰性率。
5,、交叉反應
試劑盒與待檢藥物類似物,、代謝物或共同存在的藥物測定交叉反應率。
6,、保存期
保存期通過保存條件的穩(wěn)定性試驗結(jié)果確定,。
7、ELISA試劑盒復核試驗
復核試驗主要內(nèi)容應包括：
（1）定量方法：檢測限,、IC50以及至少兩個添加濃度的準確度和精密度,，并與理化方法（或與具代表性進口試劑盒）比較。
（2）定性方法：檢測限,、假陽性率和假陰性率,。