ELISA試劑盒時間一般不需要嚴格控制,，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔適當縮短或延長反應時間，及時判斷,。此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),，陰性孔可保持無色,，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行,。在定量測定中,，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確,。
TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上,，邊反應觀察結果,。OPD底物顯色一般在室外溫或37 ℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間,，可使本底值增高,。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行,，顯色反應結束時加入終止液終止反應,。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后，顯色由橙轉(zhuǎn)向棕,。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性,，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達,，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色,。TMB的終止液有多種,，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪,，是目視判斷的良好終止劑,。
此外，ELISA試劑盒各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成,，此時可用特定的波長（450 nm）測讀吸光值,。比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，ELISA試劑盒然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗,，需先將板置于標準96孔的座架中，才可進行比色,。在加底物液顯色前,，先將軟板邊緣剪凈，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中,。