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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>如何快速進行ELISA試劑盒酶免疫測定
ELISA試劑盒由于各種抗原成份,,包括小分子的半抗原,,ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,,因而免疫測定的使用規(guī)模極廣,,在臨床查驗中可用于測定:
1) 體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量很少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等,。
2) 激素,,包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物,。
4) 病原體抗原,,HBsAg、HBeAg等,。
5) 另外,,也可利用純化的抗原檢測標(biāo)本中的抗體,例如抗-HBs等,。
5.符號的免疫測定
ELISA試劑盒如上所述,,免疫測定是一種很敏感的測定辦法,抗原抗體反響后直接測定構(gòu)成的沉積或濁度,,敏感度可達5~10μg/ml,,但在臨床查驗中,某些待測物在標(biāo)本中的含量遠低于這一水平,,因而要尋覓增加敏感度的辦法,。符號的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以符號,經(jīng)過測定符號物來進步敏感度,。在放射免疫測定和中,,ELISA試劑盒符號物分別為放射性核素和酶,,zui后用測定放射性和酶生機來計算待檢物的量,,敏感度可比直接測定沉積物進步數(shù)百至數(shù)千倍。在符號免疫測定中,,一般參加過量的符號試劑以確保與待測物*反響,。以符號抗體(Ab ※)檢測抗原(Ag)為例,,反響式如下:
Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
在反響產(chǎn)品中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ,如不將兩者別離而測定符號物,,測得的成果將為兩者之和,。因而,游離符號物與結(jié)合符號物的別離是符號免疫測定中的重要進程,??刹捎枚喾N手段,固相載體是其中之一,。如將抗原或抗體包被在固相載體上,,然后再與符號的抗原或抗體直接反響,結(jié)合的符號物被固定在載體上,,而游離的符號物留于溶液中,。這樣能夠經(jīng)過洗刷將游離的Ab※除掉,結(jié)合符號物的測定可在固相上進行,。IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性,。因而IgM抗體的測定,對某些流行癥如甲型肝炎有較高的臨床確診價值,。
1.3 抗原抗體反響
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結(jié)合構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物的進程是一種動態(tài)平衡,,其反響式為:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力,能夠用平衡常數(shù)K表明:
K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]
ELISA試劑盒高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上十分適合,,兩者結(jié)合結(jié)實,,不易解離。解離后的抗原或抗體均能堅持原有的結(jié)構(gòu)和活性,,ELISA試劑盒因而可用親和層析法來提純抗原或抗體,。在抗血清中,特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分,。用親和層析法提取的特異性抗體,,稱為親和層析純抗體,使用于免疫測定中可得到更好的效果,。
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