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如何快速進(jìn)行ELISA試劑盒酶免疫測(cè)定

時(shí)間:2017/12/26閱讀:1534
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ELISA試劑盒由于各種抗原成份,,包括小分子的半抗原,ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,,利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,,因而免疫測(cè)定的使用規(guī)模極廣,在臨床查驗(yàn)中可用于測(cè)定:
1) 體液中的各種蛋白質(zhì),,包括含量很少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等,。
2) 激素,包括小分子量的甾體激素等,。
3) 抗生素和藥物,。
4) 病原體抗原,HBsAg,、HBeAg等,。
5) 另外,也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體,,例如抗-HBs等,。
5.符號(hào)的免疫測(cè)定
ELISA試劑盒如上所述,免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定辦法,,抗原抗體反響后直接測(cè)定構(gòu)成的沉積或濁度,,敏感度可達(dá)5~10μg/ml,,但在臨床查驗(yàn)中,某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平,,因而要尋覓增加敏感度的辦法,。符號(hào)的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以符號(hào),,經(jīng)過(guò)測(cè)定符號(hào)物來(lái)進(jìn)步敏感度。在放射免疫測(cè)定和中,,ELISA試劑盒符號(hào)物分別為放射性核素和酶,,zui后用測(cè)定放射性和酶生機(jī)來(lái)計(jì)算待檢物的量,敏感度可比直接測(cè)定沉積物進(jìn)步數(shù)百至數(shù)千倍,。在符號(hào)免疫測(cè)定中,,一般參加過(guò)量的符號(hào)試劑以確保與待測(cè)物*反響。以符號(hào)抗體(Ab ※)檢測(cè)抗原(Ag)為例,,反響式如下:
Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
在反響產(chǎn)品中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ,,如不將兩者別離而測(cè)定符號(hào)物,測(cè)得的成果將為兩者之和,。因而,,游離符號(hào)物與結(jié)合符號(hào)物的別離是符號(hào)免疫測(cè)定中的重要進(jìn)程??刹捎枚喾N手段,,固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上,,然后再與符號(hào)的抗原或抗體直接反響,,結(jié)合的符號(hào)物被固定在載體上,而游離的符號(hào)物留于溶液中,。這樣能夠經(jīng)過(guò)洗刷將游離的Ab※除掉,,結(jié)合符號(hào)物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。IgM抗體一般為保護(hù)性抗體具有免疫性,。因而IgM抗體的測(cè)定,,對(duì)某些流行癥如甲型肝炎有較高的臨床確診價(jià)值。
1.3 抗原抗體反響
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結(jié)合構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物的進(jìn)程是一種動(dòng)態(tài)平衡,,其反響式為:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力,,能夠用平衡常數(shù)K表明:
K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]
ELISA試劑盒高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上十分適合,,兩者結(jié)合結(jié)實(shí),不易解離,。解離后的抗原或抗體均能堅(jiān)持原有的結(jié)構(gòu)和活性,,ELISA試劑盒因而可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中,,特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分,。用親和層析法提取的特異性抗體,稱(chēng)為親和層析純抗體,,使用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果,。

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