在ELISA試劑盒試驗中各種酶標儀功能都會有所不同,，所以在運用中應具體閱讀說明書，再進行下一步操作,。
自從20世紀60-70年代面世以來,，Elisa法得到*科研工作者的認可及推重，在歐美及我國取得很大的推行,，尤其是國內(nèi)生化范疇的長足發(fā)展,。ELISA試劑盒有著準確性高、靈敏度高,、特異性強等許多的長處,，它在檢測抗體、抗原等方面有很好的運用,，深受廣闊用戶朋友的喜愛,。但是，在試驗過程中,，也需求留意許多問題，特別是顯色,、比色問題,。
顯色 
ELISA試劑盒顯色是ELISA中的終究一步溫育反響，此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品,。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素,。在一定時刻內(nèi)，陰性孔可堅持無色,，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強,。恰當提高溫度有助于加快顯色進行。在定量測定中,，參加底物后的反響溫度和時刻應按規(guī)則力求準確,。定性測定的顯色可在室溫進行，時刻一般不需求嚴格控制,，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色恰當縮短或延伸反響時刻,，及時判別。
OPD（鄰苯二胺）底物顯色一般在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深,，再延伸反響時刻,，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,，顯色反響應避光進行,，顯色反響結(jié)束時參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙轉(zhuǎn)向棕,。
TMB（四甲基聯(lián)苯胺）受光照的影響不大,，可在室溫中置于操作臺上，邊反響觀察成果,。但為確保試驗成果的安穩(wěn)性,，宜在規(guī)則的恰當時刻閱讀成果。TMB經(jīng)HRP作用后,，約40分鐘顯色達高峰,，隨即逐漸削弱，至2小時后即可*消退至無色,。TMB的停止液有多種,，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色維持較長時刻（12-24小時）不褪,，是目視判別的杰出停止劑,。此外，進口elisa試劑盒各類酸性停止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成,，此刻可用特定的波長（450nm）測讀吸光值,。
比色 
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗,，需先將板置于規(guī)范96孔的座架中，才可進行比色,。在加底物液顯色前,，先將軟板邊際剪凈，這樣,，此板就可*平妥坐入座架中,。
比色時應先以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經(jīng)任何反響僅加底物液的孔）和空白孔,，以記載本次試驗的試劑情況,。這以后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,，然后進行核算,。
比色成果的表達以往通用光密度（oplical density，OD）,，現(xiàn)按規(guī)則用吸光度（absorbence,，A），兩者意義相同,。一般的表明辦法是,，將吸收波長寫于A字母的右下角,，如OPD的吸收波長為492nm，表明辦法為“A492nm”或“OD492nm”,。
酶標比色儀
酶標比色儀簡稱酶標儀,，一般指于測讀ELISA成果吸光度的光度計。針對固相載體方式的不同,，各有特制的適用于板,、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀,。酶標儀的主要功能指標有：測讀速度,、讀數(shù)的準確性、重復性,、準確度和可測規(guī)模,、線性等等。的酶標儀的讀數(shù)一般可準確到0.001,，準確性為±1%,，重復性達0.5%。舉例說,，若某孔測得的A值為1.083,，則該孔相對于空氣的實在A值應為1.083± 0.01(1.073～1.093)，重復測定數(shù)次,，其A值均應1.083±0.05（1.078～1.088）在之間,。酶標儀的可測規(guī)模視各酶標儀的功能而不同。一般的酶標儀在0.000～2.000,，新型號的酶標儀上限拓展達2.900,，乃至更高,。超出可測上限的A值常以“*”或“over”或其它符號表明,。應留意可測規(guī)模與線性規(guī)模的不同，線性規(guī)模常小于可測規(guī)模,，比方某一酶標儀的可測規(guī)模為0.000～2.900,，而其線性規(guī)模僅0.000～2.000，這在定量ELISA中制造規(guī)范曲線時應予留意,。
酶標儀不該安頓在陽光或強光照射下,，操作時室溫宜在15-30℃，運用前先預熱儀器15-30分鐘,，測讀成果更安穩(wěn),。
ELISA試劑盒測讀A值時，要選用產(chǎn)品的靈敏吸收峰,，如OPD用492nm波長,。有的酶標儀可用雙波長式測讀,，即每孔先后測讀兩次，*次在zui適波長（W1）,，第2次在不靈敏波長（W2）,，兩次測定間不移動ELISA板的方位。例如OPD用492nm為W1,，630nm為W2,，終究測得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可削減由容器上的劃痕或指印等造成的光攪擾,。