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當前位置:研域(上海)化學試劑有限公司>>技術文章>>不同類型的樣本的處理辦法
一般我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,,如血清,、血漿、尿液,、細胞培育上清或安排勻漿液等,,不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準確性的*步,,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理辦法,。
1、血清
血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,,處理也比較簡單,。
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標本,,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清分出,。(將試管或離心管歪斜放置,,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出,。)4℃ 1000×g離心20分鐘,,細心搜集上清。主張將血清分裝多份,,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融,。
采血過程中應防止溶血,,由于紅細胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為符號的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,,而導致檢測的不準確性,。一起也應防止細菌污染,由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導致檢測的假陽性,。
2,、安排勻漿液
1)將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì),。
2)將安排塊稱重,,記載后剪碎,碎塊應盡量小,,便于勻漿得更充沛
3)將安排按必定的份額參加預冷的PBS(臨用前參加蛋白酶按捺劑)勻漿,,勻漿時置于冰上或冰浴中,。(一般按安排分量:PBS體積=1:9的份額勻漿,,例如1g的安排樣本對應9mL的PBS,詳細體積可根據(jù)試驗需求恰當調(diào)整,,檢測后核算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數(shù))
4)吸取勻漿液到離心管,,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,,-20℃或-80℃保存,,防止重復凍融。
3,、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標本,,標本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿,。將上清分裝多份,,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融,。防止運用溶血或高血脂的標本,。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,,檢測時還應細心閱讀試劑盒說明書,,查看試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
4,、細胞培育上清
取細胞培育上清到離心管,,1000×g離心20min,除掉細胞碎片及雜質(zhì),,取上清,,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融,。
5,、細胞裂解液
1)吸去培育板內(nèi)的培育基,用胰酶消化細胞,,加適量培育基將細胞從培育板上吹下來,。懸浮細胞可省掉,。
2)搜集細胞懸液,1000×g離心10min,,棄去培育基,,用預冷的PBS潤洗3次。
3)參加適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前參加蛋白酶按捺劑)重懸細胞,。一般6孔板一個孔的細胞量需求150~250μL PBS重懸,。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,,再放室溫解凍樣品,重復凍融幾回,,使細胞充沛裂解,。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的意圖,。
5)4℃ 10000×g 離心10min,除掉細胞碎片,,取上清,,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融,。
6、尿液,、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,,取上清即可檢測。
總的來說,,由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,,所以應確保一切樣本均為弄清的液體,沉積或懸浮物都應離心去除,。
為了確保檢測的準確性,,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測,。
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