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研域生物推出ELISA試劑盒代測(cè):ELISA中常見問題及解決方法經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
elisa實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高,、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的運(yùn)用,,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)作用影響較大,,如不留意,,有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等成果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),,進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因,,并給出相應(yīng)的解決辦法
1. 孵育
可能原因: ①孵育時(shí)未貼封片或加蓋,,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,,難于清洗*; ②孵育時(shí)刻人為延伸,,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍,難以清洗*,。
解決辦法:①貼封片或加蓋; ②按說明過程嚴(yán)厲控制操作時(shí)刻,。
2. 洗板
可能原因:①選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。②選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),,洗液量缺乏,,導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,,導(dǎo)致洗板作用差,。③反響板過多形成洗板等候時(shí)刻長。
解決辦法: ①確保洗液注滿各孔,,洗板針疏通,,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; ②合理安排,,或多用幾臺(tái)洗板機(jī),。
3. 顯色
可能原因:①顯色劑制造后放置時(shí)刻過長或運(yùn)用過期顯色劑; ②加顯色劑時(shí)濺起孔外形成液體回流。
解決辦法:①顯色劑盡量在臨用前制造,,堅(jiān)持不期顯色劑,,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必;②加樣時(shí)保持顯色劑不外流; ③A、B液應(yīng)防止觸摸金屬器械,。
4. 挑選試劑
挑選質(zhì)量的檢測(cè)試劑,,嚴(yán)厲依照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘,。
5 加樣
可能原因:①血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣;②手藝操作中,,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時(shí)刻過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));③加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法:①標(biāo)本為血清:將血液先天然寄存1-2小時(shí)后,,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管,,采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次,放置一段時(shí)刻后,,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),,可放在2-8℃冰箱中,若要儲(chǔ)存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。② 加樣后及時(shí)放入孵箱,。③加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。④如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣,,挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。⑤標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作,。
6. 停止
可能原因如加停止液時(shí)發(fā)生較多氣泡,,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加停止液時(shí)應(yīng)防止發(fā)生氣泡,。
7. 讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等,。應(yīng)確保酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中確保酶標(biāo)板不觸摸次氯酸;盡可能完成ELISA檢測(cè)規(guī)范自動(dòng)化,,有效進(jìn)步檢測(cè)質(zhì)量,。
在實(shí)際操作中,除了挑選試劑外,,有必要嚴(yán)厲依照操作過程進(jìn)行操作,,一起作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),,以謹(jǐn)慎的工作作風(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,,才干確保檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有適當(dāng)數(shù)量的單位具有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,,這關(guān)于完成ELISA試劑盒規(guī)范化檢測(cè),、進(jìn)步檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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