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牛血清是細胞培養(yǎng)基中的中藥成份之一,。在培養(yǎng)基中加入適量血清(10%),首先可以補充細胞生長所需的生長因子,、激素,、帖附因子等,其次它具有解毒作用,,能解除脂肪酸,、重金屬和某些蛋白酶的毒性;再次,,它還能中止胰酶的作用,,并保護細胞免受機械損傷等。但是血清成分復雜,,不同來源,、不同批號生產的血清對細胞生長作用的差異較大。血清的保存期只有一年,,不同存放時期的血清的效力也不同,。所以,當新購得的血清或要在開始一個重大試驗的時候,,應首先進行牛血清的篩選,。 篩選時,通常選用正常的二倍體細胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細胞,,也可以使正要準備培養(yǎng)的細胞,。另外,用已知血清作對照,。
儀器,、材料和試劑
儀器
CO2 培養(yǎng)箱,超凈工作臺,,微量加樣器,,滅菌鍋
材料
96孔培養(yǎng)板,,刻度吸管,移液管,,試管,,吸管,廢液缸,,血球計數(shù)板,,HeLa細胞,Mel細胞
試劑
DMEM,,不同批號的血清,,胰酶,雙抗
實驗步驟
1.取HeLa細胞和Mel細胞(本來應該取正常的二倍體細胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細胞,,但是實驗室條件有限,,本組做HeLa細胞),胰酶消化后,,用無血清培養(yǎng)基(事先加雙抗)吹打成細胞懸液(避免以前血清的干擾),。計數(shù)。
2.取4000個左右的HeLa細胞加入到每行的*孔(在加之前要震蕩培養(yǎng)基),。本實驗經計數(shù)后應加11μL細胞。
3.在A和H行中*孔加入89μL含標準血清(2004.12)的培養(yǎng)基,。(對照組)
4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標準血清的培養(yǎng)基,。
5.將*孔中的液體吸100μL至第二孔,從第二孔吸100μL至第三孔,,然后相同,。zui后的100μL棄掉。這樣就形成了從*個孔到zui后一個孔的細胞梯度從大約2056,,1028等至1個,。(要吹細均勻)
6.每個孔再補加100μL含標準血清的培養(yǎng)基。這可以保證孔中的營養(yǎng)物質,。
7.在B行采取同樣的方法,。白介素ELISA試劑盒不同的是用含有需篩選的批號為011217血清代替標準血清。
8.在C至G行采用同樣的方法,。血清批號分別是030224,,040528,040830,,041012,,041016。
9.將96孔培養(yǎng)板放入CO2 培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)一周,。
10. 培養(yǎng)結束后,,觀察細胞生長的情況,。比較在同一細胞濃度下的不同學清對細胞生長的影響。在同一細胞濃度下細胞生長數(shù)zui多的培養(yǎng)基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品,。
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