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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒顯色反響應(yīng)避光運(yùn)用
這類反響的定性成果可以用肉眼判別,。ELISA試劑盒目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,,顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中,,正常人血清反響后??沙尸F(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因ELISA試劑盒的構(gòu)成和試驗(yàn)的條件不一樣而異,,因而試驗(yàn)中有必要加測(cè)陰性對(duì)照,。陰性對(duì)照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判別成果時(shí),,更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo),。此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素,。在必定時(shí)刻內(nèi),陰性孔可堅(jiān)持無色,,而陽性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng),。恰當(dāng)提高溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中,,參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求,。ELISA試劑盒定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行,時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制,,有時(shí)可根據(jù)陽性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯況恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻,,及時(shí)判別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深,,ELISA試劑盒再延伸反響時(shí)刻,,可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色,,顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響,。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后,顯色由橙轉(zhuǎn)向棕,。
TMB受光照的影響不大,,ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺(tái)上,邊反響調(diào)查成果。但為確保試驗(yàn)成果的穩(wěn)定性,,宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱覽成果,。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達(dá),,隨即逐步削弱,,ELISA試劑盒至2小時(shí)后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止,。這類停止劑尚能使藍(lán)色維持較長時(shí)刻(12-24小時(shí))不褪,是目視判別的杰出停止劑,。此外,,各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成,此刻可用特定的波長(450nm)測(cè)讀吸光值,。
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