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')膠體金') ')是一種常用的標(biāo)記技術(shù),,是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù),,有其*的優(yōu)點(diǎn)。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用,。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記,。同時(shí)在流式、電鏡,、免疫,、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能例用到。')
')1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學(xué),,此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學(xué)方法,,在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。目前在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用主要是免疫層析法')( immunochromatogra-phy)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA),,用于檢測(cè) HBsAg,、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等,,具有簡(jiǎn)單、快速,、準(zhǔn)確和無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),。
')免疫膠體金技術(shù)的基本原理:
膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸,、枸櫞酸鈉,、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),,形成帶負(fù)電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),,故稱(chēng)膠體金,。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷,可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合,,由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合,,所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。
膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外,,還可以與許多其它生物大分子結(jié)合,,如SPA、PHA,、ConA等,。根據(jù)膠體金的一些物理性狀,如高電子密度,、顆粒大小,、形狀及顏色反應(yīng),加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性,,因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué),、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域,。')
') 膠體金標(biāo)記,,實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。吸附機(jī)理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷,,與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合,。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒,。這種球形的粒子對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能,,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白,、毒素,、糖蛋白、酶,、抗生素,、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結(jié)合,,因而在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)中成為非常有用的工具,。 ')
')免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標(biāo)蛋白結(jié)合處,,在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒,,當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí),肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn),,因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中,,這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大,稱(chēng)之為免疫金銀染色,。')
')常用的免疫膠體金檢測(cè)技術(shù):')
(1)免疫膠體金光鏡染色法
細(xì)胞懸液涂片或組織切片,,可用膠體金標(biāo)記的抗體進(jìn)行染色,也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上,,以銀顯影液增強(qiáng)標(biāo)記,,使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面,可明顯增強(qiáng)膠體金標(biāo)記的敏感性,。
(')2)免疫膠體金電鏡染色法
可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合,,然后進(jìn)行負(fù)染??捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測(cè),。
斑點(diǎn)免疫金滲濾法
(3)應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作載體,先將抗原或抗體點(diǎn)于膜上,,封閉后加待檢樣本,,洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體。
(4)膠體金免疫層析法
將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,,膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上,,當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng),,溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng),,再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí),待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,,聚集在檢測(cè)帶上,,可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條,,使用十分方便,。')
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