游離氨基酸的氨基可與水合茚三酮反應(yīng),，產(chǎn)生藍紫色化合物，其顏色的深淺與游離氨基酸的含量成正比,。
分光光度計,；電子天平；容量瓶25ml或50ml 3個,；漏斗（直徑6厘米）3個,、濾紙適量；20ml刻度試管 7支,；移液管0.5ml 3支,、5ml 1支；試管架,；玻棒,；吸耳球；剪刀,；移液管架,；橡皮筋、塑料薄膜（封試管口）,；吸水紙,；擦鏡紙適量；電爐,；水浴鍋（含鐵絲筐）,。
1．3%茚三酮試劑 稱3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，貯于棕色瓶中,。此試劑應(yīng)放在冷涼處,，不宜久放,，使用期約10天。
2．氰酸鹽緩沖液（按以下方法配制）：
（1）NaCN貯備液0.01mol/L（490mg/L）,。
（2）醋酸緩沖液：稱360g醋酸鈉（含三分子結(jié)晶水）溶于約300ml無氨蒸餾水中,，加66.67ml冰醋酸再用無氨蒸餾水稀釋至1L。
取溶液（1）20ml,，用溶液（2）定容到1L,。
3．標(biāo)準氨基酸 稱取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的異丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%異丙醇稀釋至刻度,，混勻,，即為1mmol/L的標(biāo)準氨基酸貯備液，置冰箱中保存,。為了制備工作液,，可取貯備液與等量無氨蒸餾水混合，此液濃度為0.5mmol/L,，即1ml含氨基酸0.5μmol,，或氨基氮7μg。
4．95%乙醇,；5．異丙醇（分析純）,。
1．標(biāo)準曲線的制作 取20ml刻度試管18支，按下表15-1加入各試劑,。加完試劑后混勻,，在100℃水浴中加熱12min（加熱時封口），取出在冷水中迅速冷卻,，立即于每管中加入5ml 95%乙醇,，塞好塞子，猛搖試管,，使加熱時形成的紅色產(chǎn)物被空氣中的氧所氧化而褪色,，此時溶液呈藍紫色。于570nm波長下測其光密度（以空白管為參比）,，以氨基酸濃度為橫坐標(biāo),，光密度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線,，求出直線方程,。
2．樣品提取 選取有代表性的植物葉片（或其它組織），洗凈擦干,，剪碎混勻,，迅速稱取0.10～0.20g（視氨基酸含量多少而定），共稱3份，分別加入20ml刻度試管中,，再加蒸餾水10ml蓋塞（或系上塑料薄膜）,，置沸水浴中20min以提取游離氨基酸，到時取出在自來水中冷卻,，把上清液濾入25ml容量瓶中,，之后再往試管中加5ml蒸餾水,，置沸水浴上再加熱10min,，過濾并反復(fù)沖洗殘渣，zui后定容至刻度,，搖勻,。
3．樣品測定 另取4支潔凈干燥的試管，其中3支分別加入0.5ml提取液,，另一支加0.5ml蒸餾水,，然后在上述4支試管中分別加入NaCN緩沖液、水合茚三酮各0.5ml,，加完試劑后蓋塞,，置沸水浴上加熱12min，冷卻后,，再分別加5ml 95%乙醇,，搖勻，以空白作參比,，在波長570nm下測其光密度,。