細胞培養(yǎng)技術注意事項大匯總:

1. 實驗進行前,，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,，才開始實驗操作,。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,，以避免失誤混淆或細胞間污染,。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺,，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10 分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作,。

2. 無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,，必要物品，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,，其它實驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通,。實驗用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內,。實驗操作應在抬面之中央無菌區(qū)域,，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。

3. 小心取用無菌之實驗物品,，避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗,。容器打開后,，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。

4. 工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗,。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,，并選擇適當?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少 Class II)。操作過程中,，應避免引起aerosol 之產生,，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等,，并避免尖銳針頭之傷害等,。

5. 定期檢測下列項目： 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度,、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,，每周更換)。 5.3. 無菌操作臺內之airflow 壓力,，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,，預濾網(wǎng)(300小時/預濾網(wǎng)，3000 小時/HEPA),。

6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),，定期更換水槽的水。

7. 認真按照操作規(guī)程進行實驗,，一般不大會導致污染,，很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實驗失敗。

8. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),，一般在4度盡量不要超過1個月,，如在-20度存放時間可長一些，但最好也不要超過3-4個月,，可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,，但我在過去的4年里一直是作原代 細胞培養(yǎng) 的，細胞嬌弱，經(jīng)驗表明放置時間不宜過長,。

9. 關于實驗用品的清洗與消毒,，我的經(jīng)驗是：用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,，然后加少許清洗劑，以超聲波洗滌30min左右,，(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),，撈出晾干,，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后,，自來水清洗10-15遍,，雙蒸水清洗3-4遍，晾干,，高壓消毒后即可使用。

10. 許多塑料制品也可以高壓消毒,，例如培養(yǎng)瓶蓋,，膠塞，吸頭等,。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,，當然如果 money有限，如進口的培養(yǎng)板,、皿等,，也可以重復使用1-2次，我當時使用方法是將其清潔后,，使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,，我做過多次，沒有出現(xiàn)問題,。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,，最好不要重復使用，如一定要重復用,，可用環(huán)氧乙烷等消毒,，(消毒后一定要放置半年以上方可使用)。

11. 在光鏡下,，上皮細胞通常呈“鋪路石"樣排布,，細胞之間有拉絲現(xiàn)象(即距離較遠的細胞可以通過細長的觸手相連)，細胞有成片生長的特性,。而間質細胞通常呈梭形,，沒有有成片生長的特性，細胞之間的聯(lián)系不緊密,。但是細胞的形態(tài)特征會因為生長條件的改變而改變,，如HeLa細胞是上皮細胞，但是在酸性培養(yǎng)條件下會變?yōu)樗笮巍?/p>