在鏡檢時(shí),，人們總是希望能清晰而明亮的理想圖象，這就需要光學(xué)顯微鏡的各項(xiàng)光學(xué)技術(shù)參數(shù)達(dá)到一定的標(biāo)準(zhǔn),，并且要求在使用時(shí),，必須根據(jù)鏡檢的目的和實(shí)際情況來協(xié)調(diào)各參數(shù)的關(guān)系,。只有這樣，才能充分發(fā)揮顯微鏡應(yīng)有的性能,，得到滿意的鏡檢效果,。

　　醫(yī)用光學(xué)顯微鏡的光學(xué)技術(shù)參數(shù)包括：數(shù)值孔徑、分辨率,、放大率,、焦深、視場寬度,、覆蓋差,、工作距離等等。這些參數(shù)并不都是越高越好,，它們之間是相互聯(lián)系又相互制約的,，在使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)鏡檢的目的和實(shí)際情況來協(xié)調(diào)參數(shù)間的關(guān)系,，但應(yīng)以保證分辨率為準(zhǔn),。

　　1. 數(shù)值孔徑

　　數(shù)值孔徑簡寫NA，數(shù)值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術(shù)參數(shù),，是判斷兩者(尤其對物鏡而言)性能高低的重要標(biāo)志,。其數(shù)值的大小，分別標(biāo)刻在物鏡和聚光鏡的外殼上,。

　　數(shù)值孔徑(NA)是物鏡前透鏡與被檢物體之間介質(zhì)的折射率(n)和孔徑角(u)半數(shù)的正弦之乘積,。用公式表示如下：NA=nsinu/2

　　孔徑角又稱"鏡口角"，是物鏡光軸上的物體點(diǎn)與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度,?？讖浇窃酱螅M(jìn)入物鏡的光通亮就越大,，它與物鏡的有效直徑成正比,，與焦點(diǎn)的距離成反比。

　　顯微鏡觀察時(shí),，若想增大NA值,，孔徑角是無法增大的,，辦法是增大介質(zhì)的折射率n值,。基于這一原理,，就產(chǎn)生了水浸物鏡和油浸物鏡,，因介質(zhì)的折射率n值大于1，NA值就能大于1,。

　　數(shù)值孔徑最大值為1.4,，這個(gè)數(shù)值在理論上和技術(shù)上都達(dá)到了極限,。目前，有用折射率高的溴萘作介質(zhì),，溴萘的折射率為1.66,所以NA值可大于1.4,。

　　這里必須指出，為了充分發(fā)揮物鏡數(shù)值孔徑的作用,，在觀察時(shí),，聚光鏡的NA值應(yīng)等于或略大于物鏡的NA值。

　　數(shù)值孔徑與其他技術(shù)參數(shù)有著密切的關(guān)系,，它幾乎決定和影響著其他各項(xiàng)技術(shù)參數(shù),。它與分辨率成正比，與放大率成正比,，與焦深成反比,，NA值增大，視場寬度與工作距離都會相應(yīng)地變小,。

　　2. 分辨率

　　顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)的最小間距,，又稱"鑒別率"。其計(jì)算公式是σ=λ/NA

　　式中σ為最小分辨距離;λ為光線的波長;NA為物鏡的數(shù)值孔徑,?？梢娢镧R的分辨率是由物鏡的NA值與照明光源的波長兩個(gè)因素決定。NA值越大,，照明光線波長越短,，則σ值越小，分辨率就越高,。

　　要提高分辨率,，即減小σ值，可采取以下措施

　　(1) 降低波長λ值,，使用短波長光源,。

　　(2) 增大介質(zhì)n值以提高NA值(NA=nsinu/2)。

　　(3) 增大孔徑角u值以提高NA值,。

　　(4) 增加明暗反差,。

　　3. 放大率和有效放大率

　　由于經(jīng)過物鏡和目鏡的兩次放大，所以顯微鏡總的放大率Γ應(yīng)該是物鏡放大率β和目鏡放大率Γ1的乘積：　　Γ=βΓ1

　　顯然,，和放大鏡相比,，顯微鏡可以具有高得多的放大率，并且通過調(diào)換不同放大率的物鏡和目鏡,，能夠方便地改變顯微鏡的放大率,。

　　放大率也是顯微鏡的重要參數(shù)，但也不能盲目相信放大率越高越好,。顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率,。

　　分辨率和放大倍率是兩個(gè)不同的但又互有聯(lián)系的概念,。有關(guān)系式：500NA<Γ<1000NA

　　當(dāng)選用的光學(xué)顯微鏡物鏡數(shù)值孔徑不夠大，即分辨率不夠高時(shí),，顯微鏡不能分清物體的微細(xì)結(jié)構(gòu),，此時(shí)即使過度地增大放大倍率，得到的也只能是一個(gè)輪廓雖大但細(xì)節(jié)不清的圖像,，稱為無效放大倍率,。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率不足，則顯微鏡雖已具備分辨的能力,，但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見,。所以為了充分發(fā)揮顯微鏡的分辨能力，應(yīng)使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理匹配,。