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進行超薄切片前需要進行哪些工作
由于電鏡產(chǎn)生的電子束穿透能力很弱,，必須把標本切成厚度小于0.1um以下的薄片才能適用，這種薄片稱為超薄切片,。常用的超薄切片厚度是50-70nm,。
在透射電鏡的樣品制備方法中，超薄切片技術(shù)是最基本,、最常的制備技術(shù),。超薄切片的制作過程基本上和石蠟切片相似
超薄切片前的準備工作
1.修塊
一般用手工對包埋塊進行修整。將包埋塊夾在特制的夾持器上,，放在解剖顯微鏡下,，用鋒利的刀片先削去表面的包埋劑,，露出組織，然后在組織的四周以和水平面成45度的角度削去包埋劑,，修成錐體形,。
2.半薄切片定位
利用超薄切片機切厚度為1μm-5μm的切片，稱半薄切片,。將切下的片子用鑷子或小毛刷轉(zhuǎn)移到干凈的事先滴有蒸餾水的載玻片上,，加溫，使切片展平,，干燥后經(jīng)甲苯胺藍染色,，光學顯微鏡觀察定位。如果半薄切片做得好,，比一般石蠟切片更能觀察到細微結(jié)構(gòu),，效果比石蠟切片要好一些。
半薄切片進行光學顯微鏡觀察的目的：(1) 定位：通過光學顯微鏡觀察,，確定所要觀察的范圍,，然后保留要用電鏡觀察的部分，修去其余部分,。(2)便于對同一組織的同一部位進行光學顯微鏡和電鏡的對比觀察,。半薄切片定位以后，要對包埋塊作進一步的修整,。通常將塊的頂端修成金字塔形,，頂面修成梯形或長方形(最好是梯形)，每邊的長度為0.2mm～0.3mm,。
3.制刀
超薄切片使用的刀有兩種：一種是玻璃刀,，另一種是鉆石刀。由于玻璃刀價格便宜,，使用者較多,。制刀用的玻璃為硬質(zhì)玻璃，有一定的規(guī)格,，厚度為5mm～6.5mm,。
玻璃刀用專用制刀機制作。制好玻璃刀后,，要圍繞刀口制作一只水槽,，以便使超薄切片漂浮在水面上。水槽有樹膠水槽和膠布水槽兩種,。樹膠水槽有固定的形狀,，可反復(fù)使用。膠布水槽是臨時用膠布或?qū)Ｓ盟芰蠗l制作的。裝好水槽后,，用熔化的石蠟封固接口,，防止漏水。
4.載網(wǎng)和支持膜
4.1 載網(wǎng)
電鏡中使用的載網(wǎng)有銅網(wǎng),、不銹鋼網(wǎng),、鎳網(wǎng)等，一般常用銅網(wǎng),。載網(wǎng)為圓形,，直徑3mm。網(wǎng)孔的形狀有圓形,、方形,、單孔形等。
網(wǎng)孔的數(shù)目不等,，有100,、200、300目等多種規(guī)格,，可根據(jù)需要進行選擇,。
4.2 支持膜的制備
挑選并清洗好載網(wǎng)之后，要在載網(wǎng)上覆蓋一層薄膜,，這層薄膜稱支持膜,，厚度為10nm～20nm。對支持膜的要求是透明無結(jié)構(gòu),，并能承受電子束的轟擊,。常用的支持膜有火棉膠膜及聚乙烯醇縮甲醛膜(Formvar膜)，一般采用后者,。
超薄切片
超薄切片需用超薄切片機進行,。根據(jù)推進原理不同，將超薄切片機分為兩大類：一類是機械推進式切片機,，用微動螺旋和微動杠桿來提供微小推進,；另一類是熱脹冷縮式切片機，利用金屬桿熱脹或冷縮時產(chǎn)生的微小長度變化來提供推進,。
超薄切片的步驟包括：(1)安裝包埋塊,；(2)安裝玻璃刀；(3)調(diào)節(jié)刀與組織塊的距離,；(4)調(diào)節(jié)水槽液面高度與燈光位置,；(5)調(diào)節(jié)加熱電流及切片速度,，切片,；(6)將切片撈在有支持膜的載網(wǎng)上。