3.一般說來色譜柱不能反沖,，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

　　4.選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),，以避免固定相被破壞,。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí),，預(yù)柱為硅膠,，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

　　5.經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。

　　(下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,，作為參考：硅膠柱以正已烷(或庚烷),、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗,，所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強(qiáng)極性雜質(zhì),，已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水、甲醇,、乙腈,、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液,，那么可以省略后用水沖洗這一步,。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外，用乙腈,、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染,。陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,，除去交換性能強(qiáng)的鹽,，然后用水、甲醇,、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機(jī)物),、甲醇、水依次沖洗,。)

　　6.保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊,，防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間,。

　　7.色譜柱使用過程中,，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗,；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染,；如果柱效降低或色譜峰變形,，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,，死體積增大,。在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開柱接頭,，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1～2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱,，壓平,，再擰緊柱接頭,。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平,。柱子失效通常是柱端部分,，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5～30mm),，可以起到保護(hù)、延長柱壽命的作用,。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效,，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上,。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH=2～9范圍內(nèi)使用,。柱子使用一段時(shí)間后,，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/div>