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高速逆流色譜儀常用的溶劑體系選擇
閱讀：2464發(fā)布時間：2020-7-22
1,、分配系數測定法
一個穩(wěn)定的兩相溶劑體系是否適合于目標物質的分離,，通常要看物質在該溶劑體系中的分配系數是否在一個合適的范圍內。分配系數K=CS/CM或CU/CL,。其中CS指溶質在固定相中的濃度,，CM指在流動相中的濃度，CU指溶質在上相中的濃度,，CL指溶質在下相中的濃度,。一般而言，對HSCCC合適的K值范圍是0.5~2,。當CS/CM≤0.5時,，出峰時間太快，峰之間的分離度較差,；當CS/CM≥1時,，出峰時間太長且峰形變寬。而當0.5<CS/CM<2時,，可以在合適的時間內,，得到分離度較好的峰形。
2,、 薄層色譜法
采用薄層色譜（TLC）法也可選擇對HSCCC合適的兩相溶劑體系,。在硅膠板上作薄層色譜試驗,，用水飽和的有機層（即兩相中的有機相）作展開劑。如果需要分離的組分的Rf＞0.5（低級性溶質）,，這說明此種條件適用于這些組分混合物的分離,，而且弱極性的有機相適用于作流動相。對于極性較大的溶質Rf＜0.5,，則極性較強的那一相可作流動相。
3,、PLC掃描法
對于一個未知樣品,，可以通過HPLC掃描的方法，對樣品的復雜程度及其組分的極性程度有一個初步的了解,。具體來講,，可以將樣品注入一根15cm長的C18HPLC柱，以乙腈和水為流動相,，以1ml/min流速,，從100%乙腈梯度洗脫1h，觀察樣品出峰的位置,。如果絕大部分峰的保留時間都小于15min,，也就意味著這些組分是由含量小于25%的乙腈流動相洗脫出來的，在高速逆流色譜儀中可以采用極性溶劑體系,，如正丁醇-水等,；如果峰的保留時間是在15～50min之間，意味著這些物質具有中等極性,，在CCC中可以采用中等極性溶劑,；如果絕大部分峰在50min后洗脫出來，也就是由大于80%的乙腈流動相洗脫出來的,，那么在CCC分離中應該采用弱極性的容積體系,。
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