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制備色譜的定義及概述
閱讀：2679發(fā)布時間：2017-11-27
制備色譜的定義及概述
制備色譜是指采用色譜技術(shù)制備純物質(zhì),，即分離,、收集一種或多種色譜純物質(zhì),。制備色譜中的“制備”這一概念指獲得足夠量的單一化合物,，以滿足研究和其它用途,。制備色譜的出現(xiàn),，使色譜技術(shù)與經(jīng)濟(jì)利益建立了。制備量大小和成本高低是制備色譜的兩個重要指標(biāo),。其中,，氣相制備色譜主要用于石油化工產(chǎn)品和揮發(fā)性天然產(chǎn)物的色譜純樣品制備。
制備色譜到底是什么?
(1)分析色譜的目的,，是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質(zhì)的含量,。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì),。
為了加快分離的時間與提高分離的效率,，制備色譜的的進(jìn)樣品量很大，導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,，也就必須加大色譜柱填料,，增大制備色譜的直徑和長度，使用的相對多的流動相,。
然而,，當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時候，往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品,。制備色譜,，要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對重現(xiàn)性也要考慮,。從經(jīng)濟(jì)上來說,。制備色譜要爭取少用填料，少用溶劑,，要盡可能多的得到產(chǎn)品,。
(2)樣品的前處理：
制備色譜柱子由于處理的樣品多，比分析柱子更容易受污染,，所以,，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取,、過濾,、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,，如果用得上,，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。
(3)固定相的選擇
硅膠,、鍵合固定相(如C18),、離子交換樹脂、聚酰胺,、氧化鋁,、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻(xiàn)報道,，對填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果，如,，對硅膠進(jìn)行的硝酸銀(或緩沖液)處理,。
(4)裝柱方法的選擇 根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法,，往往裝填越好分離效果越好,。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大，顆粒度的減少會導(dǎo)致裝柱的難度,。一般來說,，顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相,。濕法的目的是迫使相對稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,，從而減少空隙的形成。然而,，當(dāng)柱直徑大于20mm,，所加壓力為30-40bar時，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜,。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱,，可采用柱長壓縮技術(shù)。這種方法,，先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮,。 濕法裝柱需要一定的設(shè)備,，在柱子填完后，應(yīng)用有柱效的測量,，對柱效低的柱子應(yīng)該重填,。
(5)流動相的選擇
除了和分析色譜同樣的考慮外，在選用流動相時,，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作,。一般來說，不宜采用高毒性溶劑，對多元溶劑要盡可能的少用,。
如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,，溶劑的純度也要考慮在其中。
(6)加樣的方法
可以采用以下方法之一進(jìn)樣,。-用注射器進(jìn)樣-用旋轉(zhuǎn)閥進(jìn)樣-通過六通閥進(jìn)樣-通過主泵進(jìn)樣-通過輔泵進(jìn)樣-固體上樣
(7) 泵的選用
生產(chǎn)制備色譜泵的廠商很多,。根據(jù)有無脈沖、能承受的zui大壓力,、控制的精度,、售后服務(wù)等來選擇泵。
(8)檢測器的選用
一般的分析池的zui大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min,。而專門的制備池的zui大允許流速可為150mL/min,。有時，采用旁路分離管,，將少量流體導(dǎo)入分析池進(jìn)行檢測,，是一個不錯的辦法，但其濃度的誤差會相對較大,。
(9)組分保留時間的估計
用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間后,，按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域,。
分析譜圖的峰形狀,，對確定保留時間也有很大的參考價值。
(10)產(chǎn)品的收集
手工餾分收集費(fèi)時費(fèi)力,，自動餾分收集器有很大的方便,。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器。
(11)超載,、邊緣切割,、中心切割、放大技術(shù)與非線性效用
在制備色譜中,，因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度,，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時候,，也有一些分析色譜的時候,，不能用到的技巧。因?yàn)槠P(guān)系,，不在這里敘述,。
(12)柱轉(zhuǎn)換技術(shù)
通過接頭或者閥門，實(shí)現(xiàn)柱子的簡單延長,，或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對其中一個(或幾個)組分的精制,。
上海同田生物技術(shù)股份有限公司主營產(chǎn)品：β- 蛻皮甾酮_大豆皂苷Bb
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