在腦科學(xué)研究的廣闊領(lǐng)域中，對(duì)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的精細(xì)結(jié)構(gòu)與動(dòng)態(tài)功能的深入理解是解開(kāi)大腦奧秘的關(guān)鍵,。然而,，傳統(tǒng)的成像技術(shù)往往面臨分辨率不足的挑戰(zhàn)，尤其是在密集神經(jīng)追蹤和分子亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的精確定位上,。這些限制極大地阻礙了我們對(duì)神經(jīng)元連接,、突觸可塑性、以及細(xì)胞內(nèi)蛋白互作等核心問(wèn)題的深入探索,。
為了克服這些障礙,，我們推出了腦科學(xué)跨尺度成像解決方案,，集成了共聚焦STELLARIS系統(tǒng)、高分辨模塊Lightning,、納米超高分辨TauSTED Xtend,，以及功能成像熒光壽命模塊FALCON，為腦科學(xué)研究提供了you越的成像精度和功能分析能力,。
共聚焦STELLARIS系統(tǒng)
作為徠卡腦科學(xué)成像方案的核心,，STELLARIS系統(tǒng)以其zhuo越的光學(xué)性能和穩(wěn)定性，成為研究神經(jīng)元精細(xì)結(jié)構(gòu)buke或缺的工具,。該系統(tǒng)支持多通道同時(shí)成像,，能夠捕獲到神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)中的復(fù)雜交互，特別適用于樹(shù)突棘,、軸突等細(xì)微結(jié)構(gòu)的可視化,。此外，STELLARIS系統(tǒng)還具備高度的靈活性和可擴(kuò)展性,，可根據(jù)具體研究需求配置不同的物鏡和探測(cè)器,，滿足多樣化的實(shí)驗(yàn)要求。
NCAD染色的整個(gè)CO（cortical organoids）和ENO（expanded neuroepithelium organoids）類(lèi)器官的代表性熒光圖像,。虛線描繪了不同類(lèi)器官中rosettes的基部和神經(jīng)上皮結(jié)構(gòu)[1],。
用 GFAP（紅色）、Iba-1（綠色）和 CD68（青色）以及 DAPI（藍(lán)色）抗體染色的 40 周齡雄性 Conv-R,、GF 和 Ex-GF 小鼠海馬切片的代表性免疫熒光圖像[2],。
高分辨模塊Lightning
針對(duì)更高分辨率的需求，徠卡的高分辨模塊Lightning幫助研究人員能夠更清晰地觀察到神經(jīng)元的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),，如線粒體,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器，以及它們之間的空間定位關(guān)系,。Lightning模塊的應(yīng)用極大地?cái)U(kuò)展了我們對(duì)神經(jīng)元內(nèi)部世界的認(rèn)知邊界,。
納米超高分辨TauSTED Xtend
為了進(jìn)一步提升分辨率，徠卡發(fā)展了納米超高分辨TauSTED Xtend技術(shù),。STED（受激發(fā)射損耗）實(shí)現(xiàn)了遠(yuǎn)超傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡的分辨率。TauSTED Xtend模塊將這一技術(shù)推向了ji致,，使得分辨率達(dá)到納米級(jí)別,。這一技術(shù)革新使得研究人員能夠直接觀察到分子尺度的細(xì)節(jié)，如蛋白分子的精確定位和動(dòng)態(tài)變化,，為揭示神經(jīng)元功能機(jī)制提供了強(qiáng)有力的支持,。
來(lái)自DIV21皮質(zhì)神經(jīng)元的GFP轉(zhuǎn)染(灰色)樹(shù)突的代表性Raw STED和Tau-STED圖像[3]。用Alexa Fluor 594偶聯(lián)二抗(紅色)和直接與Abberior STAR 635P偶聯(lián)的PSD-95納米體(綠色)對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行共染色,。插圖(方形)顯示了PSD-95抗體和納米體(箭頭)共同標(biāo)記的脊柱,。Scale bars:2 µm; inset: 500 nm,。
WT、Spp1KO/KO,、AppNL-F和AppNL-F·Spp1KO/KO SLM中Homer1和Bassoon puncta共定位的STED圖像[4],。Scale bars:5 µm。
功能成像熒光壽命模塊FALCON
除了結(jié)構(gòu)成像外,，功能成像也是腦科學(xué)研究的重要方面,。徠卡的功能成像熒光壽命模塊FALCON通過(guò)測(cè)量熒光分子的壽命參數(shù)，提供了關(guān)于分子環(huán)境,、相互作用以及動(dòng)態(tài)變化的重要信息,。這一技術(shù)特別適用于研究神經(jīng)元活動(dòng)時(shí)的蛋白構(gòu)象變化、離子濃度波動(dòng)等生理過(guò)程,。FALCON模塊的應(yīng)用使得研究人員能夠在細(xì)胞水平上實(shí)時(shí)觀測(cè)神經(jīng)元的功能狀態(tài),，以及研究細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的變化，如氧化還原狀態(tài),、pH值變化等,，為深入理解大腦的工作原理提供了新的視角。
造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞(HSPCs)代謝表型的FLIM分析示意圖(左)和體外分化的造血干細(xì)胞和新分離的HSPCs沿分化層次的代表性圖像(右)[5],。Scale bars:10 µm,。
徠卡腦科學(xué)跨尺度成像解決方案，無(wú)論是精細(xì)結(jié)構(gòu)的可視化還是功能狀態(tài)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),，這一方案都展現(xiàn)了強(qiáng)大的潛力和廣泛的應(yīng)用前景,。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和完善，徠卡顯微將繼續(xù)為揭開(kāi)大腦奧秘貢獻(xiàn)更多的智慧和力量,。
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