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熒光多色顯微技術(shù)是多重成像技術(shù)的一個(gè)方面,，可在同一實(shí)驗(yàn)中觀察和分析同一樣本中的多種元素--每種元素都標(biāo)記有不同的熒光染料,。這不僅能提高實(shí)驗(yàn)效率，還能獲得更可靠,、更有意義的結(jié)果,，從而了解細(xì)胞和組織內(nèi)的復(fù)雜過程。本圖集展示了使用THUNDER和STELLARIS平臺(tái)獲得的標(biāo)有多種熒光探針的樣本圖像,。

使用 STELLARIS 共聚焦

平臺(tái)進(jìn)行多色成像

STELLARIS共聚焦顯微鏡系列配備了新一代白光激光器（WLL）,。搭配Power HyD檢測器,，STELLARIS可提供wanquan自由的光譜。您可以根據(jù)自己的研究需要進(jìn)行多色實(shí)驗(yàn),，而不受儀器的限制,。通過使用TauSense工具集，STELLARIS還可以利用熒光染料/蛋白質(zhì)基于生命周期的特性,，為多色成像增加一個(gè)新的維度,。

用TauSTED對活細(xì)胞中的細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜

進(jìn)行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標(biāo)記的錯(cuò)綜復(fù)雜的細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò),，以及用CF594（青色 - Biotium）標(biāo)記的運(yùn)輸囊泡,。

內(nèi)吞途徑和線粒體動(dòng)力學(xué)

使用STELLARIS STED采集的圖像。

用MitoView Green標(biāo)記的線粒體,。用CellBright NIR750標(biāo)記的膜泡,。使用TauSeparation，根據(jù)與囊泡內(nèi)吞成熟相關(guān)的pH值成熟步驟進(jìn)行壽命成分分離,，揭示不同的內(nèi)吞步驟,。

用TauSTED對活細(xì)胞中的細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜

進(jìn)行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。U2OS細(xì)胞上的活細(xì)胞TauSTED,，使用了肌動(dòng)蛋白（SiR-actin,，熒光）,、微管（SPY555-tubulin,，青色）和膜（CF488A偶聯(lián)WGA，綠色）標(biāo)記,。SiR和SPY可從Spirochrome購買,。CF染料可從Biotium Inc.比例尺：10 微米。

用TauSTED對活細(xì)胞中的細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜進(jìn)行成像,。

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處：肌動(dòng)蛋白（Lifeact-Venus,，Era 等人，植物細(xì)胞生理學(xué),，2009年）,、葉綠體（內(nèi)源性熒光）和細(xì)胞壁（碘化丙啶）。通過使用基于熒光壽命的信息,，可以觀察到肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò),、細(xì)胞壁和葉綠體的復(fù)雜細(xì)節(jié)。圖片使用TauContrast技術(shù)獲取,。樣本由海德堡大學(xué)COS的Melanie Krebs博士提供,。

揭示細(xì)胞骨架和線粒體之間的相互作用

用SiR-Actin（657 - 740 納米檢測范圍）、AF750-Tom20（760 - 790 納米）,、AF790-Tubulin（810 - 850 納米）標(biāo)記的 Cos-7 細(xì)胞,。

左圖：傳統(tǒng)砷化鎵檢測器所見,。
右圖：配備Power HyD R檢測器的STELLARIS 8所見。光譜結(jié)果（右）顯示了實(shí)驗(yàn)中使用的熒光團(tuán)的激發(fā)光譜（灰色）和發(fā)射光譜（紅色）,。
樣品提供：Jana D?hner 博士和 Urs Ziegler 博士,。Urs Ziegler，蘇黎世大學(xué),。

充分利用活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：更少曝光,，更多信息

使用傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡對同一樣本中的多個(gè)不同熒光標(biāo)簽進(jìn)行成像時(shí)，通常需要對每個(gè)顏色通道進(jìn)行順序成像,，以避免光譜串色而降低圖像質(zhì)量,。在動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中，這意味著由于獲取每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所需的時(shí)間增加,，您可能會(huì)錯(cuò)過快速的動(dòng)態(tài)事件,。此外，樣品在臺(tái)上停留的時(shí)間更長,，因此在實(shí)驗(yàn)過程中保持細(xì)胞健康更具挑戰(zhàn)性,。下圖是用4種不同的熒光團(tuán)標(biāo)記的活體 HeLa 細(xì)胞拍攝的圖像，用于識(shí)別細(xì)胞核,、肌動(dòng)蛋白,、微管蛋白和質(zhì)膜。有了STELLARIS,，就可以一次性采集所有4個(gè)通道的圖像,，而不必對細(xì)胞連續(xù)成像4次。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標(biāo)記的錯(cuò)綜復(fù)雜的細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò),，以及用CF594（青色 - Biotium）標(biāo)記的運(yùn)輸囊泡,。

LAS X Navigator--用于實(shí)驗(yàn)的GPS

上圖：小鼠胚胎（如第 X 頁所示）的201張拼接圖像的詳細(xì)視圖（單張圖像）。
(第 X 頁所示）的細(xì)節(jié)圖（單張）,。透射光檢測器（TLD）成像,，通過488納米、561納米和660納米的激發(fā)波長創(chuàng)建 RGB 疊加圖像,。
488nm,、561nm和638nm波長的激發(fā)，生成RGB疊加圖,。
底部：與上述相同視場的TauContrast圖像,，最大投影展示。

以 "光速 "探索

用LIGHTNING對細(xì)胞內(nèi)成分進(jìn)行成像,。

用STELLARIS 8采集的圖像,。
用AF488（微管，灰色）、SPY555（肌動(dòng)蛋白,，品紅色）,、MitoTrackerRed（線粒體內(nèi)腔，綠色）,、Atto 647N（TOM 20,，線粒體，紅色）和CF770 WGA（膜,，青色）標(biāo)記的U2OS細(xì)胞,。