腫瘤的發(fā)展與腫瘤微環(huán)境息息相關(guān),。在癌癥發(fā)生中，正常組織中和諧的細(xì)胞相互作用關(guān)系被破壞,，逐漸演變成適應(yīng)腫瘤生長(zhǎng)的條件,。腫瘤微環(huán)境的變化，可能導(dǎo)致不同細(xì)胞區(qū)室的基因,、蛋白表達(dá)及信號(hào)通路的改變,。針對(duì)腫瘤微環(huán)境的檢測(cè)和表征研究可為癌癥治療提供新的思路。
傳統(tǒng)分析技術(shù)受取樣精確度以及分析靈敏度的限制,，無(wú)法精準(zhǔn)獲取靶向部位,，而對(duì)其中特異代謝物的差異表征就更加困難。激光顯微切割技術(shù)可以方便地對(duì)特定的組織區(qū)域精確分離,。結(jié)合高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)技術(shù),，從而將空間定位準(zhǔn)確的微區(qū)細(xì)胞代謝譜進(jìn)行全面準(zhǔn)確的表征。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
樣品制備：
將腫瘤組織做冰凍切片,，樣本置于徠卡LMD7激光顯微切割載物臺(tái),；接收端放置PCR管用于分離體的接收。選擇合適切割面積 ( ~1,000,000µm2用于代謝物建庫(kù),；~20,000µm2用于大樣本靶向分析)開(kāi)始進(jìn)行切割（圖1）,。切割完成后，小心收集樣品,。共收集到來(lái)自10個(gè)病人的原位癌 (25份),、浸潤(rùn)癌 (18份)、癌旁組織 (13份) 樣本共46份,，每一份在平行的兩張張切片上同樣位置分別收集作為代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)分析,。
圖1. 組織切片樣本用于激光顯微切割分離體制備,。經(jīng)過(guò)蘇木精-伊紅（HE）染色確定組織切片中不同類(lèi)型的細(xì)胞區(qū)域（左）包括原位癌、浸潤(rùn)癌和癌旁細(xì)胞,，在平行的未染色組織切片中的相應(yīng)位置進(jìn)行激光顯微切割獲得分離體（右）,。
樣品提取：
裝有樣品的PCR管加入50µL提取溶液（代謝組學(xué)樣本：甲醇:乙腈:水 2:2:1, v/v,；脂質(zhì)組學(xué)樣本：二氯甲烷:甲醇 1:1, v/v）,，振蕩混勻，超聲15 min,，離心后將全部溶液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶中待LC-MS/MS分析,。
LC-MS條件：
樣品通過(guò)ExionLC™系統(tǒng)分別串聯(lián)SCIEX ZenoTOF 7600和SCIEX Triple Quad 7500 系統(tǒng)進(jìn)行代謝物建庫(kù)和大樣本量靶向代謝組學(xué)/脂質(zhì)組學(xué)分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
數(shù)據(jù)通過(guò)SCIEX OS 軟件3.1中的定性,、定量功能處理,。在代謝組學(xué)樣本中共檢出100個(gè)代謝物，脂質(zhì)組學(xué)樣本中共檢出502個(gè)代謝物,，并將這些化合物在所有的樣本進(jìn)行峰面積提取,。將獲得的各種組織中化合物含量信息進(jìn)行生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以浸潤(rùn)癌組織v.s.癌旁組織為例,，尋找表征區(qū)分這兩種組織的差異代謝物,。以t-檢驗(yàn)p-value值小于0.05以及PLSDA分析VIP值不小于1作為篩選條件，對(duì)這兩種組織的區(qū)分,，共找到84個(gè)差異代謝物（圖2）,。
圖2. 浸潤(rùn)癌組織v.s.癌旁組織中的差異代謝物熱圖。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,，包括t-test的p值小于0.05以及PLSDA計(jì)算的VIP值不小于1作為篩選條件,，獲得了84個(gè)差異代謝物。
小
結(jié)
通過(guò)對(duì)組織切片進(jìn)行激光顯微切割獲取空間定位準(zhǔn)確的微量樣本,，并與SCIEX ZenoTOF 7600和SCIEX Triple Quad7500系統(tǒng)相結(jié)合,，實(shí)現(xiàn)微量細(xì)胞水溶性和脂溶性代謝物的全面表征以及高靈敏度組學(xué)分析。
可將此方案應(yīng)用于其他組織切片樣本,，助力空間組學(xué)研究的開(kāi)展,。
感謝SCIEX中國(guó)的支持
相關(guān)產(chǎn)品
Leica LMD6 & LMD7激光顯微切割系統(tǒng)
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
8
立即詢價(jià)
您提交后，專(zhuān)屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)