由于電鏡產(chǎn)生的電子束穿透能力很弱，必須把標(biāo)本切成厚度小于0.1um以下的薄片才能適用,，這種薄片稱(chēng)為超薄切片,。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
在透射電鏡的樣品制備方法中,，超薄切片技術(shù)是最基本,、最常的制備技術(shù)。超薄切片的制作過(guò)程基本上和石蠟切片相似
超薄切片前的準(zhǔn)備工作
1.修塊
一般用手工對(duì)包埋塊進(jìn)行修整,。將包埋塊夾在特制的夾持器上,，放在解剖顯微鏡下，用鋒利的刀片先削去表面的包埋劑,，露出組織,，然后在組織的四周以和水平面成45度的角度削去包埋劑，修成錐體形,。
2.半薄切片定位
利用超薄切片機(jī)切厚度為1μm-5μm的切片,，稱(chēng)半薄切片。將切下的片子用鑷子或小毛刷轉(zhuǎn)移到干凈的事先滴有蒸餾水的載玻片上,，加溫,，使切片展平,，干燥后經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色，光學(xué)顯微鏡觀察定位,。如果半薄切片做得好,，比一般石蠟切片更能觀察到細(xì)微結(jié)構(gòu)，效果比石蠟切片要好一些,。
半薄切片進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察的目的：(1) 定位：通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察,，確定所要觀察的范圍，然后保留要用電鏡觀察的部分,，修去其余部分,。(2)便于對(duì)同一組織的同一部位進(jìn)行光學(xué)顯微鏡和電鏡的對(duì)比觀察。半薄切片定位以后,，要對(duì)包埋塊作進(jìn)一步的修整,。通常將塊的頂端修成金字塔形，頂面修成梯形或長(zhǎng)方形(最好是梯形),，每邊的長(zhǎng)度為0.2mm～0.3mm,。
3.制刀
超薄切片使用的刀有兩種：一種是玻璃刀，另一種是鉆石刀,。由于玻璃刀價(jià)格便宜,，使用者較多。制刀用的玻璃為硬質(zhì)玻璃,，有一定的規(guī)格,，厚度為5mm～6.5mm。
玻璃刀用專(zhuān)用制刀機(jī)制作,。制好玻璃刀后,，要圍繞刀口制作一只水槽，以便使超薄切片漂浮在水面上,。水槽有樹(shù)膠水槽和膠布水槽兩種,。樹(shù)膠水槽有固定的形狀，可反復(fù)使用,。膠布水槽是臨時(shí)用膠布或?qū)Ｓ盟芰蠗l制作的,。裝好水槽后，用熔化的石蠟封固接口,，防止漏水,。
4.載網(wǎng)和支持膜
4.1 載網(wǎng)
電鏡中使用的載網(wǎng)有銅網(wǎng)、不銹鋼網(wǎng),、鎳網(wǎng)等,，一般常用銅網(wǎng)。載網(wǎng)為圓形,，直徑3mm,。網(wǎng)孔的形狀有圓形,、方形、單孔形等,。
網(wǎng)孔的數(shù)目不等,，有100、200,、300目等多種規(guī)格,，可根據(jù)需要進(jìn)行選擇。
4.2 支持膜的制備
挑選并清洗好載網(wǎng)之后,，要在載網(wǎng)上覆蓋一層薄膜,，這層薄膜稱(chēng)支持膜，厚度為10nm～20nm,。對(duì)支持膜的要求是透明無(wú)結(jié)構(gòu),，并能承受電子束的轟擊。常用的支持膜有火棉膠膜及聚乙烯醇縮甲醛膜(Formvar膜),，一般采用后者,。
超薄切片
超薄切片需用超薄切片機(jī)進(jìn)行。根據(jù)推進(jìn)原理不同,，將超薄切片機(jī)分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是機(jī)械推進(jìn)式切片機(jī),，用微動(dòng)螺旋和微動(dòng)杠桿來(lái)提供微小推進(jìn)；另一類(lèi)是熱脹冷縮式切片機(jī),，利用金屬桿熱脹或冷縮時(shí)產(chǎn)生的微小長(zhǎng)度變化來(lái)提供推進(jìn)。
超薄切片的步驟包括：(1)安裝包埋塊,；(2)安裝玻璃刀,；(3)調(diào)節(jié)刀與組織塊的距離；(4)調(diào)節(jié)水槽液面高度與燈光位置,；(5)調(diào)節(jié)加熱電流及切片速度,，切片；(6)將切片撈在有支持膜的載網(wǎng)上,。
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