熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具,,由光源,、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。熒光顯微鏡利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像,。
熒光顯微鏡多采用200W的超高壓汞燈作光源,它是用石英玻璃制作,,中間呈球形,,內(nèi)充一定數(shù)量的汞,工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電,,引起水銀蒸發(fā),,球內(nèi)氣壓迅速升高,當(dāng)水銀*蒸發(fā)時(shí),,可達(dá)50~70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力,,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果,。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光,,足以激發(fā)各類熒光物質(zhì),因此,,為熒光顯微鏡普遍采用,。超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此,,燈室必須有良好的散熱條件,,工作環(huán)境溫度不宜太高。
超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃,,使用一些時(shí)間后,,則需要高壓啟動(dòng)(約為15000V),啟動(dòng)后,,維持工作電壓一般為50~60V,,工作電流約4A左右,。200W超高壓汞燈的平均壽命,在每次使用2h的情況下約為200h,,開動(dòng)一次工作時(shí)間愈短,,則壽命愈短,如開一次只工作20min,,則壽命降低50%,。
因此,使用熒光顯微鏡時(shí)盡量減少啟動(dòng)次數(shù),。燈泡在使用過程中,,其光效是逐漸降低的。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動(dòng),。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉,,以免水銀蒸發(fā)不*而損壞電極,一般需要等15min,。由于超高壓汞燈壓力很高,,紫外線強(qiáng)烈,因此燈泡必須置燈室中方可點(diǎn)燃,,以免傷害眼睛和發(fā)生爆炸時(shí)造成操作者受傷,。
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