熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。是由光源,、濾板系統(tǒng)和光學系統(tǒng)等主要部件組成,。熒光顯微鏡利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標本的熒光圖像,。細胞中有些物質(zhì),,如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光,;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一,。
熒光顯微鏡使用注意事項:
1、嚴格按照熒光顯微鏡說明書要求進行操作,,不要隨意改變程序。
2,、熒光顯微鏡應在暗室中進行檢查,。進入暗室后,接上電源,,點燃超高壓汞燈5~15min,,待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后,眼睛*適應暗室,,再開始觀察標本,。
3、防止紫外線對眼睛的損害,,在調(diào)整光源時應戴上防護眼鏡,。
4、檢查時間每次以1~2h為宜,,超過90min,,超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降,熒光減弱;標本受紫外線照射3~5min后,,熒光也明顯減弱;所以,,Z多不得超過2~3h。
5,、熒光顯微鏡光源壽命有限,,標本應集中檢查,,以節(jié)省時間,保護光源,。天熱時,,應加電扇散熱降溫,新?lián)Q燈泡應從開始就記錄使用時間,。燈熄滅后欲再用時,,須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應避免數(shù)次點燃光源,。
6,、標本染色后立即觀察,因時間久了熒光會逐漸減弱,。若將標本放在聚乙烯塑料袋中保存,,可延緩熒光減弱時間,防止封裱劑蒸發(fā),。
7,、熒光亮度的判斷標準:一般分為四級,即“-”表示無或可見微弱熒光,。“+”表示僅能見明確可見的熒光,。“++”表示可見有明亮的熒光。“+++”表示可見耀眼的熒光,。
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