熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具,。是由光源,、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。熒光顯微鏡利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像,。細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一,。
熒光顯微鏡使用注意事項:
1,、嚴(yán)格按照熒光顯微鏡說明書要求進(jìn)行操作,不要隨意改變程序,。
2,、熒光顯微鏡應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后,,接上電源,,點燃超高壓汞燈5~15min,待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后,,眼睛*適應(yīng)暗室,,再開始觀察標(biāo)本。
3,、防止紫外線對眼睛的損害,,在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
4,、檢查時間每次以1~2h為宜,,超過90min,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降,,熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后,,熒光也明顯減弱;所以,Z多不得超過2~3h。
5,、熒光顯微鏡光源壽命有限,,標(biāo)本應(yīng)集中檢查,以節(jié)省時間,,保護(hù)光源,。天熱時,應(yīng)加電扇散熱降溫,,新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間,。燈熄滅后欲再用時,須待燈泡充分冷卻后才能點燃,。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源,。
6、標(biāo)本染色后立即觀察,,因時間久了熒光會逐漸減弱,。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延緩熒光減弱時間,,防止封裱劑蒸發(fā),。
7、熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn):一般分為四級,,即“-”表示無或可見微弱熒光,。“+”表示僅能見明確可見的熒光。“++”表示可見有明亮的熒光,。“+++”表示可見耀眼的熒光,。
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