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癌癥研究：快速可再現(xiàn)的生物標(biāo)記物探索

生物標(biāo)記物可用作特定疾病如癌癥的指征標(biāo)記,。這樣一來,，腫瘤微環(huán)境就容易引起人們的警覺。但在腫瘤區(qū)域和非腫瘤區(qū)域以及腫瘤本身之間存在著明顯的分子差異,。這些情況只能通過分離這些區(qū)域的特定的,、微小的部分來破譯。

 


所以，徠卡LMD系統(tǒng)允許直接將樣本收集到下游的分析容器如PCT微管當(dāng)中用于快速組織均質(zhì)化,、蛋白質(zhì)提取和酶解,。
壓力循環(huán)技術(shù)（PCT, PressureBioSciences Inc.）利用高壓為大規(guī)模分析加快樣本制備。PCT可在1小時(shí)內(nèi)完成對(duì)LMD樣本的處理,，更大的活檢組織塊則可在3小時(shí)內(nèi)完成處理。
此聯(lián)用技術(shù)可以高精度,、快速地分離腫瘤微環(huán)境,。來自不同組織區(qū)域的下游分子分析將帶來重大意義，因?yàn)橄掠畏肿涌梢赃M(jìn)行單獨(dú)分析,，而不用再作為混合物加以分析,。
 
 




激光顯微切割利用激光在細(xì)胞層面切割顯微鏡下的樣品。切割后,，徠卡LMD系統(tǒng)利用重力將解剖物收集到試樣下方的容器內(nèi),。
 
單細(xì)胞精度下的生物標(biāo)記物探索工作流程
徠卡激光顯微切割系統(tǒng)能夠精準(zhǔn)切割您感興趣的單個(gè)細(xì)胞，改進(jìn)您的工作流程,。所以工作都在可視化控制之下,，不會(huì)污染到周圍組織。


1. 樣本制備

激光顯微切割通常會(huì)用到專門的薄膜切片,。LMD的樣本制備較為直觀,，可以從組織學(xué)的經(jīng)典制備方法中獲得。 下游蛋白質(zhì)組學(xué)方面,，我們推薦使用PET薄膜切片（幾乎不存在軟化劑）或DIRECTOR™切片以滿足*無薄膜消融,。 石蠟包埋使組織樣品形成組織，可以切成薄片,?；蛘呖梢岳美鋬銮衅瑏碇苽錁颖厩衅?br /> 我們將提供最合適您應(yīng)用的LMD切片,。

 




 
2. 固定和染色

LMD應(yīng)用中可根據(jù)感興趣的結(jié)構(gòu)來對(duì)組織進(jìn)行固定和染色,。此處包括了明場(chǎng)和熒光染色。 該步驟可通過染色設(shè)備實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化處理,。 絕大多數(shù)染色劑一般都與下游蛋白組學(xué)相容,。盡管如此，我們依然有必要做提前的調(diào)查,。

 
3. 可視化和ROI

徠卡LMD系統(tǒng)可自動(dòng)化生成樣品的全玻片圖像概覽,，輕松導(dǎo)航至您的感興趣區(qū)域（ROI）。 ADM軟件模塊能夠識(shí)別出您的感興趣區(qū)域并自動(dòng)標(biāo)記形狀,，或者您可以手動(dòng)勾勒出形狀,。 有關(guān)徠卡LMD系統(tǒng)的更多信息 激光顯微切割文章與教學(xué)

 




小鼠大腦，甲酚紫。運(yùn)行ADM軟件模塊前后,，自動(dòng)識(shí)別和檢測(cè)神經(jīng)元,。
4. 激光顯微解剖

接下來在目測(cè)控制下通過激光切出特定的ROI并直接通過重力作用進(jìn)行收集。 點(diǎn)擊鼠標(biāo)即可分離出癌癥材料或任何其他ROI并進(jìn)行必要的匯集,，然后按需要收集到1個(gè)或多個(gè)不同的反應(yīng)容器內(nèi),。 您可以使用標(biāo)準(zhǔn)耗材如PCR試管，或者利用特定的LMD收集裝置將樣本直接收集到下游分析容器內(nèi)如PCT μTubes試管（Pressure BioSciences Inc.）,，詳見下一步操作,。

 
5. 蛋白質(zhì)制備

小樣本的均質(zhì)化、提取和酶解消化可利用如Pressure BioSciences Inc.的壓力循環(huán)技術(shù)（PCT）來完成,。遵循LMD-PCT工作流程可快速,、可再現(xiàn)地制備生物肽且整個(gè)過程不超過1小時(shí)（Lee S et al., Cell Reports 2020，doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066）,，能夠節(jié)省出數(shù)小時(shí)時(shí)間而且小組織樣本的制備*不用“動(dòng)手",。 有關(guān)該工作流程的更多信息敬請(qǐng)?jiān)L問： bit.ly/2AXxWdn

 




 
6. 分析
 通過質(zhì)譜法分析樣本并識(shí)別出生物標(biāo)記物。
典型研究領(lǐng)域

• 生物標(biāo)記物探索

• 癌癥研究

• 個(gè)體化醫(yī)療

• 轉(zhuǎn)譯研究

• 蛋白質(zhì)組學(xué)

• 代謝組學(xué)

 
參考文獻(xiàn)
1.    Lee S et al., Cell Reports 2020,
doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066
2.    Hunt AL et al., Cancer Res 2019;79 doi.org/10.1158/1538-7445.AM2019-4709
3.    Guo T et al., Nat Med. 2015; 21:407-13
4.   Shao S et al., Proteomics 2015; 15: 1-11
 
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