高內(nèi)涵篩選(high content screening, HCS)技術,指在保持細胞結構和功能完整性的前提下檢測被篩樣品,,分析其對細胞形態(tài),、生長,、分化、遷移,、凋亡,、代謝途徑及信號轉導等各個環(huán)節(jié)的影響,在單一實驗中獲取大量與基因,、蛋白及其他細胞成分相關的信息,,從而實現(xiàn)對化合物多靶點、多參數(shù)的同時檢測,,確定其生物活性和潛在毒性的過程,。這種量化的方法適用于大規(guī)模藥物篩選、藥理毒理實驗等等,。以往在獲取細胞圖像時,,由于被測樣品量大,而顯微鏡檢測視野小,、操作繁瑣,,檢測一張96孔板需要幾個小時的時間,難以滿足實驗需求,。今天我們以24孔板為例為大家演示如何利用THUNDER實現(xiàn)高內(nèi)涵快速掃描成像,。
首先設定好紅綠雙色通道和曝光時間,選擇適合高內(nèi)涵快速成像的ICC THUNDER方法,,然后進入LAS X Navigator導航式界面,。
然后點擊carrier,去選擇對應孔板的模具,,那這邊我們選擇24孔板即可出現(xiàn)對應畫面,。
那比如我們想在每個孔中做隨機10個點的多點掃描,點擊ok可出現(xiàn)10個位置固定的模式,。
那如果想要10個點的位置不一樣,,我們可以勾選random,這樣10個點的位置是隨機的,。
此外,,我們還可以調整點的分布,讓其更靠近中心或邊緣,。比如,,更靠中心一些,ok,,那這樣可以看到10個點更聚集在孔的中央,。
或者,我們還可以進行拼圖,,比如,,做一個5X5的拼圖,,這樣可以看到每個孔中有一個5X5視野的拼圖。
或者可以以孔的覆蓋度來進行拼圖,。比如我們選擇60%的覆蓋度,,可以看到是這個樣子。
這里以5X5拼圖為例,,可以看到右下角24個孔拍完總共需要的時間和數(shù)據(jù)大小,。
設置完成后,點擊start進行拍攝,。拍攝完成之后,,可通過鼠標滾輪對每個孔的拼圖進行放大查看,,也可以對任意一個孔的圖像進行查看,。圖像清晰、無拼接痕跡,。
以上多孔板高內(nèi)涵快速成像的操作就完成了,。
在操作視頻里,我們可見THUNDER可隨心所欲地控制多孔板高內(nèi)涵快速成像,;直觀又準確無誤的操作讓您用非常少的投入便實現(xiàn)從圖像采集到創(chuàng)建報告,;從此,您無需在學習軟件操作上花費大量的精力,,將更多的時間投入到研究中,!
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