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技術(shù)文章
色譜柱的特點和分類
點擊次數(shù)：5053 發(fā)布時間：2009-10-16
3-1 柱的結(jié)構(gòu)
1,、堵棒（或?qū)Ч埽?、接頭 3,、接頭 4,、密封圈 5、螺帽 6,、柱密封圈 7,、柱管 8、柱填料 9 10,、過濾片
3-2 柱的分類：
根據(jù)所有的擔體材料分為三種：
a.硅膠型：機械強度高,，易制成小顆粒,，理論塔板數(shù)高,。
b.聚全物型：在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定
c.羥基磷灰石型：對蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性,。
根據(jù)分離方式分類：
a.硅膠型
1） 正相：SIL--磷脂,、NH--糖,、維生素E，CN--甾類激素,。
2） 反相：ODS（C18）,、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物,。
3） 離子交換：
WAX（弱堿陰離子交換）--核苷酸,、蛋白質(zhì)
WCX（弱酸陽離子交換）--蛋白質(zhì)
SAX（強堿陰離子交換）--核苷酸
SCX（強酸陽離子交換）--兒茶酚膠
4）凝膠過濾：
Diol--蛋白質(zhì) GF--蛋白質(zhì)
b.聚合物型：
1）反相：ODP--50--肽，蛋白質(zhì),，低分化合物,。
2）離子交換：ISC--氨基酸，胍類化合物,，ISA--糖,，IC--無機離子,，PA--蛋白質(zhì),，ES--蛋白質(zhì)。
3）配位交換：SCR（磺化聚苯乙烯）--糖,。
4）離子排阻：SCR-101H 102H--有機酸
5）凝膠過濾：ION--多糖 GS--水溶性分子
6）凝膠滲透色譜（GPC）：GPD--合成分子,、橡膠,。
7）羥基磷灰石型：HPC--蛋白質(zhì),、核苷酸
按尺寸分類：
1.制備：30mm 50mm 內(nèi)徑,，半制備：20mm內(nèi)徑,。
2.分析：標準型柱：4_8mm內(nèi)徑,。
快速色譜柱：3mm內(nèi)徑,、5cm長,、4.6mm內(nèi)徑。
小孔徑柱：2.5mm內(nèi)徑,，微孔徑柱1mm內(nèi)徑,。
3-3柱的技術(shù)指標
*耐壓：不小于40Mpa。
*滲透性：反相--流動相甲醇1ml/min,，壓力3Mpa,。
正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
*柱效：理論塔板極數(shù)>3x103。
*對稱柱：葸峰不對稱因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi),。
*外觀：光潔,、標牌、尺寸,、填充劑,、流動相方向,、日期等。
ODS柱
ODS（C18）色譜柱是將十八烷基鍵合在擔體的表面,，然后填充的柱，在HPLC中應(yīng)用廣,。在HPLC中反相色譜的引用占70%,，其中極大部分 使用的是ODS（C18）。本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，內(nèi)徑4.6mm,長度150mm,。
一般反相色譜系統(tǒng),，流動相為極性溶劑，如水,、甲醇、乙腈,，非極性固定相,，如十八烷基,。反相系統(tǒng)簡單,，重復(fù)性好,，柱子能長期穩(wěn) 定工作,，能完成分離,、分析任務(wù)的60-80%,，所以分析工作者使用得zui多的是反相柱,。
柱的使用和維護
由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況,，組分的定性,，定量分析，所以在操作時必須十分注意,。
通常柱子損壞表現(xiàn)為：柱壓升高，柱效下降,，保留值改變,，峰形崎變等。
以反相為列,，它要求填料處于甲醇或乙腈中,，不使柱子干枯，并注意下列事項：
* 勿使柱子受較強振動
* 較長時間不用時,，應(yīng)在柱中充滿甲醇,，并把兩頭封死，盡量不使干枯,。
* 當用水和甲醇（或乙腈）混合液體溶劑時,，工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個小時,，使柱子處于甲醇中,，因水 易繁殖微生物,， 使柱子堵塞,，并降低柱效。
* 當使用KH2PO4等緩沖液時,，鹽的濃度宜低，否則鹽容易析出,，柱效降低,，柱壓升高，使用后 必須用水沖洗（ 絕不能用甲醇沖洗）使緩沖液全部溶于水排出,，然后再用甲醇沖洗,。
* 硅基固定相不宜在PH>8時使用，此時容易產(chǎn)生絮狀物析出,，堵塞柱子,。
* 當流動相呈酸性時,，使用后必須用水沖洗,，因酸使柱效降低,，后再用甲醇沖洗,。
* 流動相經(jīng)過過濾處理,。
* 樣品也經(jīng)過過濾處理。
* 樣品有時能復(fù)蓋填料得活性點,，使柱壓升高，保留時間下降,，防止方法是樣品經(jīng)過過濾,。
* 樣品組分的不可逆吸附，使柱壓升高,，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白質(zhì),、糖）防止方法是加保護柱和溶劑反沖,， zui常用的是四氫呋喃,。
* 當流動相從A換到B時，A,、B不相溶,，必須選擇一能同A、B互溶劑C,，先換成C再把C換成B,，zui常用的中間液是異丙醇,。
* 由于長期使用,，在較大的壓力下，擔體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,，使柱效下降，峰形畸變,。維護方法：卸下 接頭,，用甲醇把填料調(diào)成糊狀,，填入柱內(nèi),，同時將過濾片用超聲波清洗機清洗一次。
1,、堵棒（或?qū)Ч埽?、接頭 3,、接頭 4,、密封圈 5、螺帽 6,、柱密封圈 7,、柱管 8、柱填料 9 10,、過濾片
3-2 柱的分類：
根據(jù)所有的擔體材料分為三種：
a.硅膠型：機械強度高,，易制成小顆粒,，理論塔板數(shù)高,。
b.聚全物型：在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定
c.羥基磷灰石型：對蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性,。
根據(jù)分離方式分類：
a.硅膠型
1） 正相：SIL--磷脂,、NH--糖,、維生素E，CN--甾類激素,。
2） 反相：ODS（C18）,、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物,。
3） 離子交換：
WAX（弱堿陰離子交換）--核苷酸,、蛋白質(zhì)
WCX（弱酸陽離子交換）--蛋白質(zhì)
SAX（強堿陰離子交換）--核苷酸
SCX（強酸陽離子交換）--兒茶酚膠
4）凝膠過濾：
Diol--蛋白質(zhì) GF--蛋白質(zhì)
b.聚合物型：
1）反相：ODP--50--肽，蛋白質(zhì),，低分化合物,。
2）離子交換：ISC--氨基酸，胍類化合物,，ISA--糖,，IC--無機離子,，PA--蛋白質(zhì),，ES--蛋白質(zhì)。
3）配位交換：SCR（磺化聚苯乙烯）--糖,。
4）離子排阻：SCR-101H 102H--有機酸
5）凝膠過濾：ION--多糖 GS--水溶性分子
6）凝膠滲透色譜（GPC）：GPD--合成分子,、橡膠,。
7）羥基磷灰石型：HPC--蛋白質(zhì),、核苷酸
按尺寸分類：
1.制備：30mm 50mm 內(nèi)徑,，半制備：20mm內(nèi)徑,。
2.分析：標準型柱：4_8mm內(nèi)徑,。
快速色譜柱：3mm內(nèi)徑,、5cm長,、4.6mm內(nèi)徑。
小孔徑柱：2.5mm內(nèi)徑,，微孔徑柱1mm內(nèi)徑,。
3-3柱的技術(shù)指標
*耐壓：不小于40Mpa。
*滲透性：反相--流動相甲醇1ml/min,，壓力3Mpa,。
正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
*柱效：理論塔板極數(shù)>3x103。
*對稱柱：葸峰不對稱因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi),。
*外觀：光潔,、標牌、尺寸,、填充劑,、流動相方向,、日期等。
ODS柱
ODS（C18）色譜柱是將十八烷基鍵合在擔體的表面,，然后填充的柱，在HPLC中應(yīng)用廣,。在HPLC中反相色譜的引用占70%,，其中極大部分 使用的是ODS（C18）。本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，內(nèi)徑4.6mm,長度150mm,。
一般反相色譜系統(tǒng),，流動相為極性溶劑，如水,、甲醇、乙腈,，非極性固定相,，如十八烷基,。反相系統(tǒng)簡單,，重復(fù)性好,，柱子能長期穩(wěn) 定工作,，能完成分離,、分析任務(wù)的60-80%,，所以分析工作者使用得zui多的是反相柱,。
柱的使用和維護
由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況,，組分的定性,，定量分析，所以在操作時必須十分注意,。
通常柱子損壞表現(xiàn)為：柱壓升高，柱效下降,，保留值改變,，峰形崎變等。
以反相為列,，它要求填料處于甲醇或乙腈中,，不使柱子干枯，并注意下列事項：
* 勿使柱子受較強振動
* 較長時間不用時,，應(yīng)在柱中充滿甲醇,，并把兩頭封死，盡量不使干枯,。
* 當用水和甲醇（或乙腈）混合液體溶劑時,，工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個小時,，使柱子處于甲醇中,，因水 易繁殖微生物,， 使柱子堵塞,，并降低柱效。
* 當使用KH2PO4等緩沖液時,，鹽的濃度宜低，否則鹽容易析出,，柱效降低,，柱壓升高，使用后 必須用水沖洗（ 絕不能用甲醇沖洗）使緩沖液全部溶于水排出,，然后再用甲醇沖洗,。
* 硅基固定相不宜在PH>8時使用，此時容易產(chǎn)生絮狀物析出,，堵塞柱子,。
* 當流動相呈酸性時,，使用后必須用水沖洗,，因酸使柱效降低,，后再用甲醇沖洗,。
* 流動相經(jīng)過過濾處理,。
* 樣品也經(jīng)過過濾處理。
* 樣品有時能復(fù)蓋填料得活性點,，使柱壓升高，保留時間下降,，防止方法是樣品經(jīng)過過濾,。
* 樣品組分的不可逆吸附，使柱壓升高,，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白質(zhì),、糖）防止方法是加保護柱和溶劑反沖,， zui常用的是四氫呋喃,。
* 當流動相從A換到B時，A,、B不相溶,，必須選擇一能同A、B互溶劑C,，先換成C再把C換成B,，zui常用的中間液是異丙醇,。
* 由于長期使用,，在較大的壓力下，擔體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,，使柱效下降，峰形畸變,。維護方法：卸下 接頭,，用甲醇把填料調(diào)成糊狀,，填入柱內(nèi),，同時將過濾片用超聲波清洗機清洗一次。