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超分辨率顯微鏡平臺LiveCodim是一個通用的超分辨率成像平臺,，具有任何標準熒光顯微鏡使用的接口,。它是高分辨率,、低光毒性的活體成像解決方案,。
超分辨率顯微鏡平臺應(yīng)用
超分辨率顯微鏡平臺建立了一種新的超分辨率成像模式,，為SR在細胞生物學(xué)中的主要關(guān)鍵挑戰(zhàn)提供了答案：保持生物樣品的完整性,、技術(shù)復(fù)雜性。
超分辨率顯微鏡平臺包含一個通用的附加組件,，用于任何標準顯微鏡,。它包括寬視場、共焦和超分辨率模式,，以提供一個完整的解決方案,，特別適合改裝。
這項技術(shù)基于獲得patent的錐形衍射顯微鏡（CODIM）強大的光束整形器,，能產(chǎn)生可控的和局部的光模式,，用于掃描光毒性非常低、光漂白可以忽略的生物樣品,。

超分辨率顯微鏡平臺工作步驟
第一步：
在共焦顯微鏡上設(shè)置定期實時觀察,，并優(yōu)化圖像采集設(shè)置。
第二步：
將所需區(qū)域放置在整個視野的中心,，并執(zhí)行5倍共焦放大,。
第三步：
選擇要在超分辨率模式下成像的感興趣區(qū)域，并定義CODIM采集設(shè)置,。
第四步：
啟動CODIM超分辨率采集,，然后在共焦窗口中確認結(jié)果。
第五步：
反復(fù)重復(fù)這個過程,，檢查多個區(qū)域,。
超分辨率顯微鏡平臺優(yōu)勢
•高性能超分辨率多色成像| 4個熒光通道
•分辨率更好或等于120 NM XY |使用光結(jié)構(gòu)和掃描點方法提高分辨率
•活體細胞成像?低光毒性和低光漂白使體內(nèi)SR研究成為可能
•穿透深度?Z疊加能力和“抑制"來自其他平面的信號
•標準樣品制備?標準熒光顯微鏡樣品制備流程
•與所有熒光顯微鏡無縫集成
•精簡易用的應(yīng)用?自主處理算法，無需用戶調(diào)整多個參數(shù)

超分辨率顯微鏡平臺技術(shù)
錐形衍射光束整形器
2006年,，gabriely.Sirat證明了錐形衍射可以作為一種實用的光束整形工具,，并建議創(chuàng)建一種多功能的光束整形器，并將其應(yīng)用于超分辨熒光顯微鏡,。薄雙軸晶體將規(guī)則入射光束的點擴散函數(shù)（PSF）轉(zhuǎn)化為一系列廣泛的光分布,，分布的選擇由輸入和輸出偏振控制,。
實際上,，光束整形是通過在可控偏振器之間封閉雙軸晶體來實現(xiàn)的；這種簡單的光學(xué)裝置,，類似于偏振計,，能夠在微秒甚至更快的時間內(nèi)從一種模式切換到另一種具有不同拓撲結(jié)構(gòu)的模式。此外,，這些圖案是*共局域化的,，因為它們是由相同的主光束產(chǎn)生的。
利用CODIM實現(xiàn)超分辨率
CODIM光束整形器被用作共焦模塊的附加組件,，并在樣品上掃描分布,，為每個掃描點產(chǎn)生幾個顯微圖像,。由于點掃描的幾何結(jié)構(gòu)，我們的系統(tǒng)創(chuàng)建了一個減少的漫射光數(shù)量相比,，基于廣域技術(shù),。
CODIM光束整形器使用錐形衍射原理產(chǎn)生緊湊的局部光分布。每個顯微圖像包含大量的高頻,，接近阿貝極限（與艾里模式相比,，高達3倍）（圖4）。
投影在樣品上的這些光分布是使用復(fù)雜的專有算法進行分析的,。這允許重建超分辨率圖像,，對于一般物體，分辨率提高到2倍,。此外,，這些算法，利用正約束和稀疏性,，允許分辨率進一步提高,，為足夠的樣本。
最終,，低得多的峰值功率分布,、高量子產(chǎn)率相機的使用以及更長的相機曝光時間的結(jié)合，大大降低了發(fā)送到樣品的光的峰值功率和能量,。這就是這種方法光漂白和光毒性很低的原因,。這也避免了熒光團飽和的問題，使該方法線性和定量,。