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流式細(xì)胞儀的工作原理
點擊次數(shù)：4987 發(fā)布時間：2016-4-28
流式細(xì)胞儀主要由四部分組成：流動室和液流系統(tǒng),，激光源和光學(xué)系統(tǒng)，光電管和檢測系統(tǒng),，計算機(jī)和分析系統(tǒng),。四大系統(tǒng)共同完成信號的產(chǎn)生,、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測時將待測細(xì)胞或微粒制成細(xì)胞懸液,，進(jìn)行熒光染色后加入樣品管中,。以一定壓力將待測樣品壓人流動室，在高壓下磷酸緩沖液（鞘 液）從鞘液管噴出,，鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,，組成一個圓形流束（鞘流）,，待測細(xì)胞在鞘液包繞下單行排 列，依次通過檢測區(qū),。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源,。經(jīng)過聚焦后的光束，垂直照射在樣品流上,，當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物通過激光照射區(qū)時,，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi) 部不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號,，這些信號以細(xì)胞為中心向空間360o 立體角發(fā)射,，產(chǎn)生散射光和熒光信號。散射光包括前向角散射和側(cè)向角散射,。前向角散射與被測細(xì)胞直徑的平方密切相關(guān),，反映細(xì)胞體積的大小。側(cè)向角散射光對細(xì) 胞膜,、胞質(zhì)及核膜的折射率更為敏感,，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。經(jīng)熒光染色的細(xì)胞受到適合的光波激發(fā)后產(chǎn)生的熒光通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電 信號,。zui常用的光電轉(zhuǎn)換器是光電倍增管,。從光電倍增管輸出的電信號需要經(jīng)過放大后才能被傳送到計算機(jī)，經(jīng)模／數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)轿C(jī)處理器形成數(shù)據(jù)文件,，保存 在計算機(jī)上,。保存在計算機(jī)上的數(shù)據(jù)可在脫機(jī)后再進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。
細(xì)胞的分選是通過分離含有單細(xì)胞 的液滴而實現(xiàn)的,。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,，待測細(xì)胞就分散在這些液滴之中,。將這些液滴充以正負(fù) 不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的正負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板時,，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),，落人各自的收集容器中,，不予充電的液滴落人中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細(xì) 胞的分離,。
流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)圖