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單克隆抗體鑒定
點(diǎn)擊次數(shù)：1815 發(fā)布時(shí)間：2016-4-26
抗體的鑒定
對制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的,，應(yīng)做下述幾個(gè)方面的鑒定：
1．抗體特異性的鑒定
除用免疫原（抗原）進(jìn)行抗體的檢測外,，還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗(yàn),，方法可用ELISA,、IFA法。例如：①制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb,，除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外,，還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng)，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體,。②制備抗重組的細(xì)胞因子的單克隆抗體,，應(yīng)首先考慮是否與表達(dá)菌株的蛋白有交叉反應(yīng)，其次是與其它細(xì)胞因子間有無交叉,。
2．McAb的Ig類與亞類的鑒定
一般在用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行篩選時(shí)已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型,。如果用的是酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的兔抗鼠IgG或IgM，則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類,。至于亞類則需要用標(biāo)準(zhǔn)抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴(kuò)或夾心ELISA來確定,。在作雙擴(kuò)試驗(yàn)時(shí)，如加入適量的PEG（3%）,，更有利于沉淀線的形成,。
3．McAb中和活性的鑒定
用動(dòng)物或細(xì)胞的保護(hù)實(shí)驗(yàn)來確定McAb的生物學(xué)活性。例如,，如果確定抗病毒McAb的中和活性,，則可用抗體和病毒同時(shí)接種于易感的動(dòng)物或敏感的細(xì)胞，來觀察動(dòng)物或細(xì)胞是否得到抗體的保護(hù),。
4．McAb識別抗原表位的鑒定
用競爭結(jié)合試驗(yàn),，測相加指數(shù)的方法，測定McAb所識別抗原位點(diǎn),，來確定McAb的識別的表位是否相同,。
5．McAb親合力的鑒定
用ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗(yàn)來確定McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合的親合力。
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
1,、制備抗原,。
2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,。
3,、動(dòng)物免疫。
4,、試取血進(jìn)行測試,，看看是否成功免疫,。
5、如果成功免疫,，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,，采集全部血清。
6,、純化出抗體,。
7、鑒定抗體,。包括純度以及特異性,。