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流式細胞凋亡實驗原理
點擊次數(shù)：3324 發(fā)布時間：2016-3-30
其原理主要是根據(jù)細胞凋亡時在細胞,、亞細胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變,。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變,、細胞膜成分的改變和細胞形態(tài)的改變等,，其中細胞核的改變特征性,，主要包括以下幾個方面：
1. 細胞核的改變
由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發(fā)生改變,。研究表明,，用各種染色體熒光染料對經(jīng)固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低,。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標志之一,。
2. 光散射特性
凋亡細胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細胞儀上,，前散射光與細胞的大小有關(guān),，而側(cè)散射光反映的是光在細胞內(nèi)的折射作用，與細胞內(nèi)的顆粒多少有關(guān),。在細胞凋亡時,，細胞固縮，體積變小,，故前散射光降低,，這一特性往往被認為是凋亡細胞的特點之一。此外細胞凋亡時由于染色體降解,，核破裂形成,，細胞內(nèi)顆粒往往增多，故凋亡細胞側(cè)散射光常增加,。細胞壞死時,，由于細胞腫脹，其前散射光增大,；側(cè)散射光在細胞壞死時也增大,，因此可根據(jù)前散射光和側(cè)散射光區(qū)別凋亡細胞和壞死細胞。但需要注意的是,，根據(jù)前散射光和側(cè)散射光判斷凋亡細胞的可靠性受被檢測細胞形態(tài)上的均一性和核胞漿比率影響很大,。因此在某些淋巴細胞凋亡中，用光散射特性檢測凋亡的可靠性較好,，而在腫瘤細胞凋亡中,，其可靠性就較差。根據(jù)光散射特性檢測凋亡細胞zui主要的優(yōu)點是可以將光散射特性與細胞的表面免疫熒光分析結(jié)合起來,，用以區(qū)別經(jīng)這些特殊處理發(fā)生選擇性凋亡的淋巴細胞亞型,。也可用于活細胞的分類。