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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具,。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá),、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。

簡(jiǎn)介

轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類(lèi)途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例,；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率zui高的方法,，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是,，病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,，常常對(duì)細(xì)胞類(lèi)型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及,。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點(diǎn)。

需要指出的一點(diǎn),，無(wú)論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),，要獲得*的轉(zhuǎn)染結(jié)果，可能都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,，從細(xì)胞類(lèi)型,、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié),，都需要考慮,。

方法

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法

陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用,，將DNA分子包裹入內(nèi),，形成DNA脂復(fù)合物,，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,，再通過(guò)融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,，是目前實(shí)驗(yàn)室zui方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法,。由于脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞有一定的毒性,，所以轉(zhuǎn)染時(shí)間一般不超過(guò)24小時(shí)。常用細(xì)胞類(lèi)型：cos- 7 ,、BHK,、NIH3T3 、Hela等,。

電穿孔轉(zhuǎn)染法

電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi),，這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或兒乎無(wú)法轉(zhuǎn)入時(shí)建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染,。一般情況下,，高電場(chǎng)強(qiáng)度會(huì)殺50%-70%的細(xì)胞。現(xiàn)在針對(duì)細(xì)胞死亡開(kāi)發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護(hù)劑,，可以大大的降低細(xì)胞的死亡率,，同時(shí)提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。

病毒感染

對(duì)于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無(wú)法成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系建議用病毒感染,，此法可以快速100%感染,，檢測(cè)成功率高。

常用步驟

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

① 將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體^[1]體積：DNA質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘,。

4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基清洗一次。

5. 加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí),。

6. 到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)決定是否移除混合液,，之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí),。