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細胞污染的檢測與排除
點擊次數(shù)：1709 發(fā)布時間：2016-3-29
細胞污染主要是指細胞培養(yǎng)液中混入對細胞生存有害的成分或細胞成分不純。細胞培養(yǎng)時的污染主要包括3個方面：①微生物污染：如支原體,、病毒,、細菌和真菌。②化學(xué)污染：如重金屬或其他非培養(yǎng)必需化學(xué)試劑,。③細胞交叉污染,。
一、細胞污染的檢測
(一)真菌污染
在微生物污染中，以真菌污染zui多,。zui常見真菌：煙曲霉,、黑曲霉、毛霉菌,、白念珠菌,、酵母菌等。真菌種類繁多,，形態(tài)各異,，但污染后很容易發(fā)現(xiàn)。肉眼可見,，大多呈白色或zui黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面；鏡下觀察呈絲狀,、管狀或樹枝狀菌絲,，縱橫交錯穿行于細胞之間。但是念珠菌和酵母菌呈卵圓形態(tài),，散在于細胞周邊和細胞之間牛長,。
(二)細菌污染及其檢測
大腸埃希菌、枯草桿菌,、假單胞菌和葡萄球菌等是較常見的污染細菌,。細菌污染后大多能改變培養(yǎng)液pH使培養(yǎng)液變混濁；多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃,，出現(xiàn)明顯污濁現(xiàn)象,。也有的對培養(yǎng)液無肉眼可見影響，只在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)菌體時才能感知污染,。
(三)支原體污染
支原體污染是細胞培養(yǎng)中zui常見,、不易被察覺并可以干擾實驗結(jié)果的一種污染。細胞受支原體污染后,，多數(shù)細胞無明顯變化,，或有微細變化卻由于傳代和換液而被緩解。外觀上往往給人以“正常”的感覺,，實則污染細胞會受到多方面潛在的影響,，如細胞變形、抑制細胞生長,。
不同的微生物污染對細胞的影響有差別,，檢測方法也不盡相同：可以通過目測、顯微鏡觀察,、電鏡檢查,、微生物培養(yǎng)實驗、免疫學(xué)和分子生物學(xué)等方法進行確定,。
二,、細胞污染的排除
培養(yǎng)的細胞一旦被微生物污染,，應(yīng)及時處理。通常選高壓滅菌被污染的細胞,，然后棄掉,。如果有價值的細胞被污染，并且污染程度比較輕,，可通過及時排除污染物,，挽救細胞恢復(fù)正常。常用的排除微生物污染方法有如下幾種：
(一)抗生素排除法
抗生素是細胞培養(yǎng)中殺滅微生物的主要手段,。一些有價值的細胞被污染后,，需用抗生素挽救，在這種情況下,，可采用5～lO倍于常用量的沖擊法,，加入高濃度抗生素后作用24～48h，再換人常規(guī)培養(yǎng)液,。
(二)加溫除茵
根據(jù)支原體耐熱性能差的特點,。有人將受支原體污染的細胞置于4l℃中作用5～10h(zui長可達18h)以殺滅支原體。但41℃對培養(yǎng)細胞本身也有較大影響,，故在處理前,，應(yīng)先進行預(yù)試驗。確定m限度殺傷支原體而對細胞影響較小的處理時間,。
(三)動物體內(nèi)接種
受微生物污染的腫瘤細胞可接種在同種動物皮下或腹腔,，借動物體內(nèi)免疫系統(tǒng)消滅污染的微生物，腫瘤細胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長,，待一定時間后,，從體內(nèi)取出再進行培養(yǎng)繁殖。
(四)與巨噬細胞共培養(yǎng)
在良好的體外培養(yǎng)條件下巨噬細胞可存活7～10d,，并可分泌一些細胞生長因子支持其他細胞的克隆生長,。與體內(nèi)的情況相似，巨噬細胞在體外培養(yǎng)條件下仍然可吞噬微生物并將其消化,。利用96孔培養(yǎng)板將極少量的培養(yǎng)細胞與巨噬細胞共培養(yǎng),，可以在高度稀釋培養(yǎng)細胞、極大地降低微生物污染程度的同時,，更有效地發(fā)揮巨噬細胞清除污染的效能,。本方法與抗生素聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。