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技術(shù)文章
為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,？
點擊次數(shù)：3731 發(fā)布時間：2015-11-18
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標本和加酶結(jié)合物后,?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation),，有人稱之為孵育,，在ELISA 中似不恰當。ELISA 屬固相免疫測定,，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA 反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,。溫育常采用的溫度有 43℃、37℃,、室溫和4℃(冰箱溫度)等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELI SA 方法作反應(yīng)動力學研究時,，實驗表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2 小時,，產(chǎn)物的生成可達,。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度,，有些試驗在 43℃進行,，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以形成zui多的沉淀,。但因所需時間太長,，在ELISA 中一般不予采用。保溫的方式除有的 ELISA 儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴,，可將ELISA 板置于水浴箱中，ELISA 板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,，ELISA 板應(yīng)放在濕盒內(nèi),，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布,，zui后將ELISA 板放在濕紗布上,。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此,。無論是水浴還是濕盒溫育,，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應(yīng),，操作時的室溫應(yīng)嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標準室溫溫度是指 20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育,。室溫溫育時,，ELISA 板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確,。為保證這一點,，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定.