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技術(shù)文章
如何選擇Z佳的全血DNA,、RNA提取方法？
點擊次數(shù)：2446 發(fā)布時間：2010-8-3
如何選擇*的全血DNA,、RNA提取方法,？
從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說是zui基本的工作了，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實驗和分析,，可供選擇的方法非常多,，亂花漸欲迷人眼，如何選擇的方法,，成了很多人實驗開始前zui難以抉擇的事情,。我們從兩個方面，層層剝繭,，分析*的實驗方法,。
1,、 全血的采集保存和DNA的提取
I. 用含抗凝劑的采血管進行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素,，EDTA更好一些,，不會影響下游的反應(yīng)，如果沒有采血管,，也可以自己添加抗凝劑EDTA,，提前準(zhǔn)備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液,，顛倒混勻即可,。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年內(nèi)均可以提取,，保存時間越短,，提取的質(zhì)量越高，在2個月內(nèi)提取,。
II. DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種（比如Qiagen,、Promega、Bioteke,；摒棄酚氯仿手提的方法,，時間長毒性大），原理及步驟基本相同,。雖然各公司推出了N多型號,，讓人不知如何去選擇，但從原理和操作步驟看,，基本就是離心柱和溶液型兩種,。一般來說，離心柱（DP1801）的提取純度高一些,，但是處理量?。?.1-1ml）、得率略低,；溶液型（DP2101或DP2201）的提取量大（1-10ml）得率也高于離心柱,。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上，一般選擇溶液型的方法提取.在說到國產(chǎn)和進口差別的時候,，很多人以為進口一定比國產(chǎn)的好,，我們覺得沒有，只有更好,！在不斷的進行試驗優(yōu)化之后,，全血基因組DNA提取試劑盒DP2101或DP2201開創(chuàng)了第三代技術(shù)，不需要蛋白酶K消化，進口的都是要借助蛋白酶K的??！DP2101或DP2201減少了蛋白酶K現(xiàn)配現(xiàn)用的麻煩和消化的時間，而且提取量和穩(wěn)定性更好,。
III. 非抗凝血（凝固血）能否提??？答案是肯定的,，而且一點都不麻煩，提取效果和抗凝血沒有差別,！
2,、 全血RNA如何提取
I. 全血RNA提取過程哪些是RNA降解的因素？
全血中RNA酶是非常豐富的,，RNA在沒有保護的狀態(tài)下很容易降解,！哪些是狀態(tài)RNA不受保護呢，比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過程,，紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液,，沒有抑制RNase的成份，這時候RNA不受保護,；DNA酶消化的時候RNA也不受保護,，這個時候也沒有抑制RNase的成份。
II. 什么樣的提取方法更好,？
我們在選擇方法的時候要傾向于對RNA全程有保護的方法,！一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后從白細(xì)胞提取核酸,，還要經(jīng)過DNA酶的消化去除DNA,，這種并不是的方法，過程中有很多RNA降解的因素,。所以直接裂解法是的方法,，將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液RLS——RP4001血液（液體樣本）總RNA快速提取試劑盒（離心柱型）的裂解液，迅速顛倒混勻,。裂解液RLS含有強烈的蛋白變性劑,，能迅速變性蛋白，是RNase變性,，不能對RNA降解,。裂解后的混合液還可以用來運輸，以避免RNA降解,，這個方法成為博奧生物制作表達(dá)譜芯片RNA運輸和提取的推薦方法
環(huán)境微生物DNA提取方法的突破
農(nóng)藥,、除草劑、各種污染物,、人工合成物等異生物質(zhì),，對環(huán)境和土壤微生物的多樣性,、種群變化產(chǎn)生明顯影響；轉(zhuǎn)基因作物是否發(fā)生土壤基因轉(zhuǎn)移的檢測,，轉(zhuǎn)基因作物的安全性評價等
方面的研究,，都需要準(zhǔn)確的提取高質(zhì)量的DNA進行檢測！
土壤中可培養(yǎng)的微生物可能不及所有微生物總數(shù)的0.3%,，常規(guī)提取DNA的方法很難提取到DNA,，很難把土壤中的腐殖酸去除干凈，而微量的腐殖酸就可能導(dǎo)致PCR失敗,。
目前上商用的試劑盒雖然能提取到土壤中微生物的DNA,，但由于破碎方法采用玻璃珠或者鋼珠破碎，導(dǎo)致基因組斷裂嚴(yán)重,，影響DNA質(zhì)量,；第二，由于必須購買破碎的破碎機或振蕩器,，增加其使用成本,；第三，其試劑盒為了保證DNA純度,，采用了包括玻璃奶,、離心吸附柱串聯(lián)的純化方式，導(dǎo)致了DNA大量的損失,，得率很低,，很難真正反映出土壤中微生物的多樣性。
土壤基因組DNA快速提取試劑盒（DP4001）采用創(chuàng)新技術(shù),，摒棄了機械破碎細(xì)胞的方法,，采用酶法破碎，保證了基因組的完整性,，摒棄了玻璃奶,、離心吸附柱串聯(lián)純化DNA的方式，極大的提高了DNA的得率,，幾乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出來,，能真正反映土壤中微生物的多樣性！